小鼠外周血血小板分離液試劑盒
規(guī)格：200 mL/kit
保存：本產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。
- 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
- 在離心管中加入至少5mL的分離液（當(dāng)血液的體積大于等于3mL，加入2倍體積分離液，但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果）。
- 將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象）。
- 室溫，水平轉(zhuǎn)子200-250g ，離心15min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，最佳的分離條件需摸索）。
- 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層：最上層為富含血小板的血漿層；第三層為分離液層；分離液與血漿層之間是白色細(xì)胞層；第四層為紅細(xì)胞層。
- 小心的吸取富含血小板的血漿層到15mL潔凈的離心管中，加入10mLPBS或細(xì)胞洗滌液（如果需要得到富含血小板的血漿， 可直接吸取，不再清洗）。500g，離心20min。
- 棄上清，5mL的PBS或細(xì)胞洗滌液重懸血小板，500g，離心
20min。
- 棄上清，重懸備用。
注意事項(xiàng)：
- 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o菌條件下啟封，避免微生物污染。。
- 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，分離效果差。
- 吸取過多的血小板血漿層下層溶液會(huì)導(dǎo)致交界處白細(xì)胞混雜。
- 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），避免冷凍和冷藏。
分離示意圖
富含血小板的血漿層細(xì)胞層
分離液層
紅細(xì)胞層
- 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，降低細(xì)胞得率及純度。
- 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。
- 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以對(duì)血液稀釋或者是調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間， 摸索最佳的分離條件。
- 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。
參考文獻(xiàn)：
- Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.
- Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.
- Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.
- Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.
- Recalde HR. A simple method of obtaining monocytes in suspension. J Immunol Methods. 1984 Apr 13;69(1):71-7.
- BøyumA ,LøvhaugD ,TreslandL.Separation of leucocytes: improved cell purity by fine adjustments of gradient mediu m density and osmolality. Scand J Immunol. 1991 Dec; 34(6):697-712.
- Harris R, Ukaejiofo EO. Tissue typing using a routine one-step lymphocyte separation procedure. Br J Haematol. 1970 Feb; 18(2):229-35.