今天分享新型免疫抑制劑-他克莫司特異性雜質(zhì)穩(wěn)定性研究。他克莫司(Tacrolimus)，又名FK506，是從鏈霉菌屬中分離出的發(fā)酵產(chǎn)物，是一種大環(huán)內(nèi)酯類藥物，為一種強(qiáng)力的新型免疫抑制劑，主要通過(guò)抑制白介素-2(IL-2)的釋放，全面抑制T淋巴細(xì)胞的作用，較環(huán)孢素(CsA)強(qiáng)100倍。近年來(lái)，作為肝、腎移植的一線用藥，已在日本、美國(guó)等14個(gè)國(guó)家上市。臨床實(shí)驗(yàn)表明，其在心、肺、腸、骨髓等移植中應(yīng)用有很好的療效。同時(shí)FK506在治療特應(yīng)性皮炎(AD)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫性眼病等自身免疫性疾病中也發(fā)揮著積極的作用。

在本次實(shí)驗(yàn)中，我中心參照《歐洲藥典》11.0版“TACROLIMUS MONOHYDRATE“品種項(xiàng)”Related substances“項(xiàng)下色譜條件對(duì)他克莫司的2個(gè)特定雜質(zhì)進(jìn)行了溶液穩(wěn)定性研究，所用樣品貨號(hào)及結(jié)構(gòu)式如下圖1和圖2：

圖1：本次研究所用雜質(zhì)貨號(hào)及結(jié)構(gòu)式

   圖2：標(biāo)準(zhǔn)收錄的雜質(zhì)代碼和本次研究所用雜質(zhì)貨號(hào)對(duì)應(yīng)關(guān)系圖

在本次實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)員將RM-T031201(EP雜質(zhì)A; Ascomycin; Tacrolimus EP Impurity A; CAS NO: 104987-12-4)和RM-T031205(EP雜質(zhì)I; Tacrolimus Diene; Tacrolimus EP Impurity I; CAS NO: 104987-16-8)各取適量，分別放置在酸性、中性和堿性溶液中，分別于常溫常壓下放置0、3、6、12、24小時(shí)后參照《歐洲藥典》11.0版“TACROLIMUS MONOHYDRATE“品種項(xiàng)”Related substances“項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)。觀測(cè)隨著樣品溶液放置時(shí)間的延長(zhǎng)，色譜圖中主峰峰面積的變化，以此為根據(jù)來(lái)確定樣品的溶液穩(wěn)定性。

經(jīng)過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)樣品RM-T031201(EP雜質(zhì)A)和RM-T031205(EP雜質(zhì)I)在酸性和中性溶液中放置24小時(shí)的過(guò)程中主峰峰面積變化不大，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.0%。所以可以認(rèn)為這兩個(gè)樣品在酸性和中性溶液中放置24小時(shí)的過(guò)程中是比較穩(wěn)定的。但經(jīng)過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)樣品RM-T031201(EP雜質(zhì)A)和RM-T031205(EP雜質(zhì)I)在堿性溶液中放置24小時(shí)的過(guò)程中主峰峰面積變化較大，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為58.58%和43.19%。實(shí)驗(yàn)員匯總整理了兩個(gè)樣品在酸性、中性和堿性溶液中放置24個(gè)小時(shí)的過(guò)程中的取樣檢測(cè)數(shù)據(jù)，制作了樣品主峰峰面積隨放置時(shí)間的變化折線圖及立體對(duì)比圖，如下圖3-圖6所示。

從圖3和圖4可以看出，與樣品RM-T031201(EP雜質(zhì)A)在中性溶液中放置0小時(shí)的檢測(cè)圖譜相比，該樣品在堿性溶液中放置0小時(shí)的檢測(cè)圖譜顯示，主峰峰面積要小很多，而且有其他雜質(zhì)存在。說(shuō)明該樣品在用堿性溶液配制過(guò)程中已經(jīng)發(fā)生降解。而從圖3中可以看出樣品RM-T031201(EP雜質(zhì)A)在堿性溶液中放置3小時(shí)過(guò)程中降解較快，在堿性溶液中放置3小時(shí)后，樣品不再降解。從圖5和圖6可以看出，與樣品RM-T031205(EP雜質(zhì)I)在中性溶液中放置0小時(shí)的檢測(cè)圖譜相比，該樣品在堿性溶液中放置0小時(shí)的檢測(cè)圖譜顯示，主峰峰面積要小很多，而且有其他雜質(zhì)存在。說(shuō)明該樣品在用堿性溶液配制過(guò)程中已經(jīng)發(fā)生降解。而從圖5中可以看出樣品RM-T031205(EP雜質(zhì)I)在堿性溶液中放置3小時(shí)過(guò)程中降解較快，在堿性溶液中放置3小時(shí)后，樣品還會(huì)繼續(xù)緩慢降解。

圖3：樣品RM-T031201(EP雜質(zhì)A)在酸性、中性和堿性溶液中放置24小時(shí)的溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)匯總折線圖

圖4：樣品RM-T031201(EP雜質(zhì)A)的堿性溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)立體對(duì)比圖

圖5：樣品RM-T031205(EP雜質(zhì)I)在酸性、中性和堿性中放置24小時(shí)的溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)匯總折線圖

圖6：樣品RM-T031205(EP雜質(zhì)I)的堿性溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)立體對(duì)比圖

綜上所述，通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)樣品RM-T031201(EP雜質(zhì)A)和RM-T031205(EP雜質(zhì)I)在酸性和中性溶液中穩(wěn)定性都很好。以上兩個(gè)樣品在用堿性溶液配樣過(guò)程中就會(huì)發(fā)生部分降解，并且在檢測(cè)過(guò)程中還會(huì)持續(xù)降解。所以客戶在檢測(cè)樣品RM-T031201(EP雜質(zhì)A)和RM-T031205(EP雜質(zhì)I)時(shí)，應(yīng)避免使用堿性稀釋劑，在使用、儲(chǔ)存和運(yùn)輸過(guò)程中也不能碰堿。如果客戶對(duì)這2個(gè)樣品的穩(wěn)定性內(nèi)容有需要，可以向本公司咨詢。