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干擾素

干擾素

中文名稱(chēng)干擾素
中文同義詞人纖維母細(xì)胞干擾素;干擾素
英文名稱(chēng)INTERFERON ALPHA RECOMBINANT RAT
英文同義詞INTERFERON ALPHA RECOMBINANT RAT;interferon alpha1B;INTERFERON ALPHA RECOMBINANT RAT USP/EP/BP;Mouse Interferon γ elisa kit
CAS號(hào)307005-25-0
分子式
分子量0
EINECS號(hào)
相關(guān)類(lèi)別多肽及蛋白質(zhì)類(lèi);生物化學(xué)品;細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子;細(xì)胞;重組;重組蛋白
Mol文件Mol File
結(jié)構(gòu)式干擾素 結(jié)構(gòu)式

干擾素 性質(zhì)

儲(chǔ)存條件−70°C
形態(tài)緩沖水溶液
CAS 數(shù)據(jù)庫(kù)307005-25-0

干擾素 用途與合成方法

干擾素是一種廣譜抗病毒劑,并不直接殺傷或抑制病毒,而主要是通過(guò)細(xì)胞表面受體作用使細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白,從而抑制乙肝病毒的復(fù)制;同時(shí)還可增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的活力,從而起到免疫調(diào)節(jié)作用,并增強(qiáng)抗病毒能力,抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),清除早期惡變細(xì)胞等。
化學(xué)性質(zhì) 
干擾素是一類(lèi)在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì),耐酸,具有多種生物活性,但對(duì)各種蛋白酶敏感,可被胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶破壞而失去活性。種屬特異性很強(qiáng),只有在同種細(xì)胞上才具有抗病毒作用。干擾素的沉降率低,不能透析,可通過(guò)濾菌器。
用途 
具有廣譜抗病毒作用,治療乙型肝炎、丙型肝炎、皰疹、宮頸炎、紅眼病、尖銳濕疣等。治療毛細(xì)胞白血病。注射用于擾素可治療多發(fā)性骨髓瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、惡性黑色素瘤及喉乳頭瘤。
不良反應(yīng):肌注可見(jiàn)發(fā)熱、頭痛、肌痛、少數(shù)人有疲乏無(wú)力、胃納不佳;靜注可出現(xiàn)高熱、寒戰(zhàn)、嘔吐、腎損害、心率加快及血壓不穩(wěn)定。
生產(chǎn)方法 
方法一、Cantell氏法
分離灰黃層 將血液400ml放入含有ACD抗凝劑的塑料袋,離心取血漿,吸取灰黃層13-15ml,放于冰箱4℃過(guò)夜。
血液[ACD抗凝劑]→血漿[吸取]→[4℃]灰黃層
氯化銨處理 灰黃層加30ml緩沖鹽水溶液,再加9倍量冷的8.3g/L氯化銨液,混勻,4℃靜置10min,離心(8000r/min) 20min,去溶血上清液,加入緩沖鹽液,收集細(xì)胞沉淀,做成懸液。用氯化銨液重復(fù)處理一次,溶解殘留紅細(xì)胞。取沉淀的白細(xì)胞懸于培養(yǎng)液,置于冰浴。
灰黃層[緩沖鹽液,氯化銨液]→[4℃離心 8000r/min]細(xì)胞沉淀[氯化銨]→白細(xì)胞懸液
誘生 將稀釋的細(xì)胞懸液加白細(xì)胞干擾素,使其最后濃度達(dá)到100U/ml,37℃恒溫水浴攪拌培養(yǎng)2h。誘生后的白細(xì)胞加入仙臺(tái)病毒,使其最后濃度為100-150血凝U/ml。37℃攪拌過(guò)夜。
白細(xì)胞懸液[白細(xì)胞干擾素、仙臺(tái)病毒]→[37℃]干擾素培養(yǎng)液
離心 次日將培養(yǎng)物于2500 r/min離心30 min,取上清液即得干擾素粗品,取樣測(cè)定即可。
干擾素培養(yǎng)液[離心]→干擾素粗品
干擾素的初步精制 將干擾素粗品加入硫氰酸鉀至0.5mol/L,用鹽酸調(diào)pH 3.5,離心,棄上清液,將沉淀物加入94%冷乙醇,離心棄沉淀,上清液用鹽酸調(diào)pH 5.5,離心棄沉淀,調(diào)pH 5.8,離心,分別處理上清液和沉淀。

沉淀I精制 將以上沉淀I加入pH2的甘氨酸-鹽酸緩沖液(原體積1/50量)溶解,檢測(cè),得IIFN。
沉淀I[甘氨酸-鹽酸緩沖液]→[pH2]IIFN
上清液II的處理 上清液II調(diào)pH為8,離心,棄上清液,沉淀加0.1 mol/L PB(原體積1/50量)、0.5 mol/L硫氰酸鉀(pH為8)溶解,pH降至 5.5,離心,分別處理上清液和沉淀。

沉淀加0.1 mol/L PB(原體積1/2500量、pH 8)溶解,調(diào)pH為7-7.5,對(duì)PB(pH7.3)透析,次日離心,取上清液,檢測(cè),得PIFN-B。
沉淀[PB透析]→[pH7-7.5]上清液(PIFN-B)
上清液pH降至3,離心,沉淀加入0.1 mol/L PB(原體積1/5000量、pH8)溶解,調(diào)pH為7-7.5,對(duì)PB(pH 7.3)透析過(guò)夜,離心,取上清液,檢測(cè),得PIFN-A。
上清液[離心]→[pH3]沉淀[PB]→[pH7-7.5]上清液(PIFN-A)
方法二、童葵塘法
血細(xì)胞制備 取血液200ml,低速離心去上層血漿,保留白細(xì)胞和紅細(xì)胞,加入肝素(1300 U/ml) 2ml 和培養(yǎng)液至原血量,加入卡那霉素至濃度為100 μg/ml。
血液[2ml肝素、卡那霉素]→血漿
起動(dòng)誘生 將以上血漿,加適量干擾素,使最終濃度為100U/ml,37℃恒溫水浴1h,每15min振搖1次。
血漿[干擾素]→[37℃]血細(xì)胞培養(yǎng)液
正式誘生 啟動(dòng)后的血細(xì)胞加入新城雞瘟F系病毒,使其最后濃度為64-128血凝單位,37℃恒溫水浴1h,每15min振搖1次,低速離心去上清液。加入肝素4ml、白蛋白培養(yǎng)液(0.2%)200 m1,并加入卡那霉素至濃度為100 μg/ml。置37℃旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)18-20h。
血細(xì)胞培養(yǎng)液[F系病毒]→[37℃]沉淀[肝素、白蛋白、卡那霉素]→[37℃]培養(yǎng)物
收獲與酸處理 次日,將培養(yǎng)物離心(2000r/min),吸取上清液,鹽酸調(diào)pH 2,4℃放5天。再用氫氧化鈉調(diào)pH 6-7,有咖啡色絮狀沉淀生成,4℃放2-3天,沉淀分離取上清液,合并及除菌過(guò)濾,得粗制干擾素。
培養(yǎng)物[離心]→上清液[氫氧化鈉]→[pH2, 4℃, pH6-7]干擾素粗品
干擾素的初步精制 將干擾素粗晶加入硫氰酸鉀至0.5 mol/L,用鹽酸調(diào)pH 3.5,離心,棄上清液,將沉淀物加入94%冷乙醇,離心棄沉淀,上清液用鹽酸調(diào)pH 5.5,離心棄沉淀,調(diào)pH 5.8,離心,分別處理上清液和沉淀。

沉淀I精制 將以上沉淀I加入pH2的甘氨酸-鹽酸緩沖液(原體積1/50量)溶解,檢測(cè),得IIFN。
沉淀I[甘氨酸-鹽酸緩沖液]→[pH2]IIFN
上清液II的處理 上清液II調(diào)pH為8,離心,棄上清液,沉淀加0.1mol/L PB(原體積1/50量)、0.5 mol/L硫氰酸鉀(pH為8)溶解,pH降至5.5,離心,分別處理上清液和沉淀。

沉淀加0.1 mol/L PB(原體積1/2500量、pH 8)溶解,調(diào)pH為7-7.5,對(duì)PB(pH 7.3)透析,次日離心,取上清液,檢測(cè),得PIFN-B。
沉淀[PB透析]→[pH為7-7.5]上清液(PIFN-B)
上清液pH降至3,離心,沉淀加入0.1 mol/L PB(原體積1/5000量、pH8) 溶解,調(diào)pH為7-7.5,對(duì)PB(pH 7.3)透析過(guò)夜,離心,取上清液,檢測(cè),得PIFN-A。
上清液[離心]→[pH3]沉淀[PB]→[pH7-7.5]上清液(PIFN-A)。

安全信息

WGK Germany1

MSDS信息

干擾素 化學(xué)藥品說(shuō)明書(shū)

干擾素 上下游產(chǎn)品信息

"干擾素"相關(guān)產(chǎn)品信息
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