NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)來(lái)源于肺灌洗時(shí)的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個(gè)月。隨后，不再需要外源生長(zhǎng)因子。通過(guò)有限稀釋法從單個(gè)細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-1,TNFbeta和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長(zhǎng)因子。NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGFbeta前體。在博萊霉素刺激下，TGFbetamRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生達(dá)50%。即使達(dá)到0.001mg/mL的水平，LPS抑制還是無(wú)毒且在后續(xù)過(guò)程中可逆的。NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來(lái)源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性，此細(xì)胞懸浮-貼壁混合生長(zhǎng)。

NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)

肺；巨噬細(xì)胞；肺泡NR8383來(lái)源于肺灌洗時(shí)的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個(gè)月。隨后，不再需要外源生長(zhǎng)因子。通過(guò)有限稀釋法從單個(gè)細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-1, TNF beta和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長(zhǎng)因子。NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF beta前體。在博萊霉素刺激下，TGF beta mRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生達(dá)50%。 即使達(dá)到0.001mg/mL的水平，LPS抑制還是無(wú)毒且在后續(xù)過(guò)程中可逆的。 NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來(lái)源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。也可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

貼壁和懸浮混合；巨噬細(xì)胞NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過(guò)三個(gè)階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)／100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時(shí)期，稱指數(shù)增生期(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期)，適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。