背景及概述^[1][2]

冬凌草乙素在常溫常壓下呈白色結(jié)晶粉末狀，主要來源于冬凌草，溶于甲醇，乙醇，微溶于石油醚，幾乎不溶于水，在室溫下較為穩(wěn)定性較好，需要置于避光陰涼處保存。冬凌草乙素是從冬凌草中提取的一種烯類二萜。冬凌草又名冰凌草，具有清熱解毒、消炎止痛之功效，產(chǎn)于我國河南、河北、山西、四川等地，也是民間治療食管癌和胃癌的一種草藥。1991年我國衛(wèi)生部批準(zhǔn)將冬凌草干燥葉及地上部分作為中藥材，收入部頒中藥材標(biāo)準(zhǔn)。我國從二十世紀(jì)70年代起對冬凌草的化學(xué)成分、藥理作用及臨床應(yīng)用開始研究，并提取得到冬凌草乙素。

制備^[1]

一種冬凌草乙素的提取工藝，包括以下步驟：

1)、將冬凌草送入粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，得到粉碎的冬凌草；

2)、將粉碎的冬凌草進(jìn)行兩次乙醇回流提取，從而得到提取液；

3)、將提取液進(jìn)行濃縮分離，再加入40％的稀乙醇洗脫，接著采用70％的四氫呋喃和水作為結(jié)晶溶劑進(jìn)行結(jié)晶過濾，得到冬凌草乙素。

作為優(yōu)選，所述步驟2)中乙醇的濃度為60-85％。

本發(fā)明采用大孔吸附樹脂(40％的稀乙醇)進(jìn)行粗分，采用70％的四氫呋喃和水進(jìn)行結(jié)晶，大大提高了冬凌草乙素的提取率，并且工藝簡單，成本低。

藥理作用^[2]

體內(nèi)外抗癌實(shí)驗(yàn)表明，冬凌草乙素對很多癌細(xì)胞系都有明顯的抑制殺滅作用。冬凌草乙素對休外培養(yǎng)的艾氏腹水癌腹水型細(xì)胞有明顯細(xì)胞毒性，其50％抑制濃度為0.5μg/ml。冬凌草乙素對多種移植性腫瘤有抑制作用，它對小白鼠艾氏腹水癌，S180肝癌及L1型腹水型癌均有明顯抗腫瘤作用，使存活期明顯延長，并使部分動物長期存活，對網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤及肝癌實(shí)體型亦有明顯抗腫瘤作用。

冬凌草乙素能以時(shí)間、劑量方式顯著抑制人骨髓瘤細(xì)胞系K562和HL-60細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)凋亡。用冬凌草乙素處理細(xì)胞48～72h后，可以清楚地觀察到細(xì)胞凋亡。凋亡發(fā)生時(shí)，caspase-3酶原蛋白(32×103)分裂出17×103亞單位，同時(shí)相對分子質(zhì)量為116×103的PARP分裂產(chǎn)生89×103組分。冬凌草乙素處理細(xì)胞24～48h后，Bcl-2表達(dá)下調(diào)而Bax表達(dá)上調(diào)。

制劑^[2]

實(shí)施例1、冬凌草乙素脂質(zhì)體

取冬凌草乙素(20mg)、大豆磷脂(0.15g)于200ml燒瓶中，用15ml二氯甲烷溶解，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到一層有機(jī)脂溶性膜，加入pH7.4的磷酸鹽緩沖液10ml，振蕩，大部分膜 脫落，熱水浴超聲，直至得到均勻混懸液，顯微鏡下觀察，大部分粒子直徑小于5微米，即為冬凌草乙素脂質(zhì)體.

實(shí)施例2、冬凌草乙素非離子表面活性劑泡囊

取冬凌草乙素(30mg)、司盤60(0.08g)于250ml燒瓶中，用20ml二氯甲烷溶解，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到一層有機(jī)脂溶性膜，加入pH7.4的Tris緩沖液10ml，振蕩，大部分膜脫落，超聲，直至得到冬凌草乙素非離子表面活性劑泡囊的均勻混懸液，粒度分析儀檢測，平均粒徑為465nm。

實(shí)施例3、冬凌草乙素長循環(huán)脂質(zhì)體

取冬凌草乙素(50mg)、大豆磷脂(0.15g)、PEG化二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)(0.02g)于燒瓶中，用20ml氯仿∶異丙醚(1∶1，v/v)溶解，加入適量蒸餾水，超聲使其成為乳劑，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到凝膠態(tài)物質(zhì)，加入少量水，繼續(xù)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，凝膠態(tài)物質(zhì)脫落并分散成均勻混懸液，顯微鏡下觀察，大部分粒子直徑小于2微米，即為冬凌草乙素長循環(huán)脂質(zhì)體。

實(shí)施例4、冬凌草乙素納米粒

取冬凌草乙素(50mg)、單硬脂酸甘油酯(0.7g)、吐溫80(0.03g)于燒杯中加熱至80℃，逐漸加入含十二烷基硫酸鈉(10mg)的80℃水(10ml)，保持溫度不變，呈透明液體。再將其用注射器注入到高速攪拌的0℃水中，呈透明液體。在原子力顯微鏡下觀察，多為100納米以下的粒子。該冬凌草乙素固體脂質(zhì)納米粒混懸液可常溫放置10天未見沉淀析出。該固體脂質(zhì)納米?；鞈乙禾砑舆m當(dāng)保護(hù)劑后凍干成固體粉末，臨用前加入水，即成冬凌草乙素固體脂質(zhì)納米粒混懸液。

實(shí)施例5、冬凌草乙素微球

取冬凌草乙素(50mg)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)(0.5g)溶于5ml二氯甲烷中，加入3％的聚乙烯醇(PVA)水溶液(20ml)，高速攪拌，形成乳液，轉(zhuǎn)移至30ml的3％PVA水溶液中，在室溫下，攪拌4小時(shí)，揮發(fā)二氯甲烷，微球固化。離心微球混懸液，所得微球以蒸餾水洗滌3次，加入適量甘露醇，冷凍干燥，即得到白色粉末。用少量水分散后，可在顯微鏡下觀察到10微米以下的圓整微球，即為冬凌草乙素微球。

實(shí)施例6、冬凌草乙素乳劑

取冬凌草乙素、泊洛沙姆P188、玉米油、丙二醇加熱，全溶，溶液緩慢滴入攪拌著的pH7.4磷酸緩沖液中，得到乳劑。該乳劑經(jīng)過高壓乳勻機(jī)循環(huán)乳化3次，得到乳滴粒徑小于1微米的乳劑。該乳劑灌封于安瓿內(nèi)，經(jīng)過100℃加熱30分鐘加熱。取樣觀察，絕大部分乳滴粒徑小于5微米。該乳劑在室溫放置可保持較長時(shí)間穩(wěn)定。該乳劑可用于靜脈注射、肌肉注射，也可以用于口服。

實(shí)施例7、冬凌草乙素納米乳

取冬凌草乙素(50mg)溶于5ml油酸乙酯/四氫呋喃混合溶劑中，加入適量聚氧乙烯蓖麻油和單甘酯，加熱攪拌成溶液，在高速攪拌條件下，加入約4ml水，持續(xù)攪拌，得到半透明狀分散液體。粒度測定結(jié)果表明大部分粒子在120nm以下，即為冬凌草乙素納米乳。

實(shí)施例8、冬凌草乙素聚合物膠束

取冬凌草乙素(10mg)溶于5ml二甲基亞砜(DMSO)中，加入50mg乳酸-羥基乙酸-乙二醇共聚物溶解，放入透析袋中，再放入盛有蒸餾水的燒杯中，攪拌24小時(shí)，取出透 析袋，測定粒度，大部分粒子在50nm以下，即為冬凌草乙素聚合物膠束.

實(shí)施例9、冬凌草乙素納米凝膠

取冬凌草乙素(10mg)溶于5ml二甲基亞砜(DMSO)中，加入40mg膽固醇基普魯蘭溶解，用微量注射器緩慢注射到水中，測定分散液中的粒子直徑，大部分粒子在80nm以下，即為冬凌草乙素納米凝膠。

實(shí)施例10、冬凌草乙素固體分散體片劑

取5g冬凌草乙素溶解在熱的100ml乙醇中，與300ml含10％聚乙烯吡咯烷酮K30的乙醇溶液混合，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中減壓揮發(fā)盡乙醇，得到白色粉末狀固體，即為冬凌草乙素的聚乙烯吡咯烷酮固體分散體。該固體分散體能快速溶于水。

取上述方法制備得到冬凌草乙素固體分散體35g，加入微晶纖維素50g，羧甲基淀粉鈉10g，混勻，再加入1g硬脂酸鎂，混勻，用10mm淺凹沖壓片，得到白色光潔片劑，平均片重380g，含冬凌草乙素20mg。該片劑依照2005年版《中國藥典》溶出度測定第二法，選用900ml水作溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速50rpm，在45分鐘取樣測定冬凌草乙素溶出量，溶出百分率為93.1％。

主要參考資料

[1] CN201810687065.6 一種冬凌草乙素的提取工藝

[2] CN200910223301.X 冬凌草乙素高度分散制劑