背景[1-3]
pRb1細胞是指那些表達Rb1基因（也稱為pRb基因）的細胞。Rb1基因編碼的蛋白質(zhì)pRb1是一個關(guān)鍵的細胞周期調(diào)控因子，通過與E2F轉(zhuǎn)錄因子家族的成員相互作用來抑制細胞從G1期進入S期。這種調(diào)控機制確保了細胞在分裂前能夠完成必要的生長和修復過程。
在正常的細胞中，pRb1蛋白通過抑制E2F轉(zhuǎn)錄因子的活性來維持細胞的生長控制。然而，在某些情況下，如癌癥中，Rb1基因可能會發(fā)生突變或缺失，導致pRb1蛋白的失活或表達減少。這種情況下，細胞失去了對E2F的抑制，導致細胞過度增殖，進而可能發(fā)展成為腫瘤。
pRb1細胞在研究中通常用于研究Rb1基因的功能、細胞周期調(diào)控機制以及癌癥的發(fā)生和發(fā)展。通過操縱pRb1的表達或活性，科學家們可以深入了解其在細胞生長和分裂中的重要作用，并可能為癌癥治療提供新的思路和方法。
pRb1
pRb1細胞系培養(yǎng)操作
1)復蘇pRb1細胞系：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)pRb1細胞系傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)pRb1細胞系凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
應用[4-5]
pRb1細胞可以用于基于轉(zhuǎn)錄組測序及生物信息學分析鑒定復發(fā)性鼻息肉相關(guān)的基因與通路
基于高通量測序技術(shù)通過對復發(fā)性鼻息肉組織m RNA差異性比較,篩選與復發(fā)性鼻息肉的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的mRNA,尋找潛在的復發(fā)性鼻息肉的作用靶點,為臨床用藥提供依據(jù)。
方法:1.選取10例復發(fā)性鼻息肉患者的鼻息肉組織,pRb1細胞以及10例鼻中隔偏曲、鼻骨骨折患者的正常鼻甲黏膜標本進行全轉(zhuǎn)錄組測序。
2. 使用Illumina Nova Seq6000測序儀,選用PE150模式對上述標本進行測序。使用edge R對上述兩組測得的reads進行比對,篩選出pRb1細胞差異表達基因(篩選條件:q-value<=0.05,Fold-change>=2)。3.將上述基因在GO和KEGG數(shù)據(jù)庫中進行GO和KEGG富集分析以及蛋白互作網(wǎng)絡分析。
結(jié)果:本研究通過轉(zhuǎn)錄組測序共檢出32797個基因,其中實驗組相對對照組的差異表達基因有552個,GO富集分析顯示這些差異基因參與了STAT蛋白入核等生物過程,與免疫突觸等細胞組分有關(guān),與趨化因子受體活性等分子功能有關(guān)。KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)復發(fā)性鼻息肉的發(fā)生發(fā)展可能與原發(fā)性免疫缺陷、粘蛋白型O-聚糖生物合成、唾液分泌等通路密切相關(guān)。之后,我們還構(gòu)建了蛋白互作網(wǎng)絡,并篩選出了節(jié)點度最高的中樞基因PTPRC,并發(fā)現(xiàn)其與原發(fā)性免疫缺陷通路密切相關(guān),可能是治療鼻息肉的一個潛在靶點。
結(jié)論:1.利用全轉(zhuǎn)錄組測序及多種生物信息學工具,我們對復發(fā)性鼻息肉的基因表達譜進行了全面的分析,確定了如CD37、pRb1細胞、MUC7、PTPRC等與復發(fā)性鼻息肉作用機制相關(guān)幾個關(guān)鍵基因,原發(fā)性免疫缺陷、粘蛋白型O-聚糖生物合成、唾液分泌等與復發(fā)性鼻息肉作用機制相關(guān)的信號通路。2.通過蛋白互作網(wǎng)絡分析,我們認為,PTPRC可能是復發(fā)性鼻息肉發(fā)生的一個潛在的重要因子。3.本研究結(jié)果可能為復發(fā)性鼻息肉患者的治療策略提供新的視角,然而,需要進一步的實驗和大樣本量的額外研究來證實這些發(fā)現(xiàn)。
參考文獻
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