茜素紅 S（Alizarin Red S）是一種常用的染色方法，實(shí)質(zhì)是一種蒽醌衍生物，常用來體外檢測(cè)組織切片或者培養(yǎng)細(xì)胞的鈣質(zhì)變化。機(jī)體內(nèi)的鈣，一方面構(gòu)成骨骼和牙齒，另一方面則可參與各種生理功能和代謝過程，影響各個(gè)器官組織的活動(dòng)。茜素紅的作用機(jī)制在于它能與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復(fù)合物。

茜素紅 S染色實(shí)例

在干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的過程中，細(xì)胞表面會(huì)沉積鈣鹽，形成鈣結(jié)節(jié)。通過使用茜素紅S染色，可以染出這些鈣結(jié)節(jié)，從而判斷干細(xì)胞是否成功分化為成骨細(xì)胞。

一、茜素紅S染色的操作步驟

1、吸去培養(yǎng)基并洗滌：在成骨誘導(dǎo)分化結(jié)束后，吸去六孔板中的成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，然后使用1×PBS輕柔洗滌2~3次。這樣可以去除培養(yǎng)基中的成分，為后續(xù)的固定和染色做準(zhǔn)備。

2、固定：每孔加入2mL 4%多聚甲醛溶液（或10%福爾馬林），在室溫下固定30分鐘。多聚甲醛或福爾馬林是常用的組織固定劑，可以固定細(xì)胞和細(xì)胞內(nèi)的成分，以保持其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。3、洗滌：吸去固定液后，使用1×PBS輕柔洗滌2~3次，確保將固定液徹底清洗掉。這樣可以去除多余的固定劑，以避免對(duì)后續(xù)染色結(jié)果的干擾。4、染色：每孔加入2mL茜素紅工作液，室溫下染色5~10分鐘。茜素紅是一種常用的染色劑，可用于染色成骨組織或鈣化區(qū)域。5、洗滌：吸去茜素紅染色液后，使用1×PBS輕柔洗滌2~3次，充分洗去多余的染色液。這樣可以去除多余的染色劑，以獲得清晰的染色結(jié)果。6、觀察：每孔加入2mL 1×PBS，將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察成骨染色效果。通過觀察染色結(jié)果，可以評(píng)估成骨組織的形態(tài)和鈣化區(qū)域的分布。7、封裝和保存：染色后的六孔板用封口膜封裝，然后置于4℃保存，可保存2周。這樣可以保持染色結(jié)果的穩(wěn)定性和保存樣本的完整性。

二、注意事項(xiàng)

1、鈣結(jié)節(jié)脫落的防止：為了防止鈣結(jié)節(jié)在染色過程中脫落，所有操作應(yīng)盡可能輕緩。避免強(qiáng)烈的振蕩或沖洗，以減少鈣結(jié)節(jié)的損失。

2、茜素紅S恢復(fù)至室溫：在使用茜素紅之前，應(yīng)將其恢復(fù)至室溫。這樣可以確保茜素紅的穩(wěn)定性和染色效果。

3、染色時(shí)間的判斷：不能僅僅以誘導(dǎo)時(shí)間來決定染色時(shí)間，而應(yīng)以顯微鏡下可見的聚集的鈣結(jié)節(jié)為準(zhǔn)。每個(gè)樣本可能具有不同的鈣沉積程度，因此需要根據(jù)實(shí)際觀察來確定染色時(shí)間。

4、控制染色時(shí)間：一般情況下，茜素紅S染色的時(shí)間控制在5分鐘左右。如果染色效果較淺，可以適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間，但需注意不要過度染色。

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