背景及概述[1]
褪黑素，又名褪黑激素，其化學(xué)名為5-甲氧基-N-乙酰色胺(N-(2-(5-methoxy-1H-indol-3-yl)ethyl)acetamide)，是一種吲哚類(lèi)化合物。褪黑素的生理和藥理活性十分廣泛，主要作用是調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律、睡眠一覺(jué)醒生物節(jié)律相位轉(zhuǎn)換、改善睡眠，也具有抗氧化、清除自由基、抗炎癥、抗凋亡、降低體溫、抑制腫瘤生長(zhǎng)、抑制生殖系統(tǒng)功能、提高記憶、治療癡呆癥、延緩衰老、抗焦慮、改善嗎啡戒斷癥狀、改善骨質(zhì)疏松、抗癲癰等多種作用。在眼部，褪黑素參與調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜功能晝夜節(jié)律性變化、視網(wǎng)膜信息傳遞等。褪黑素還與毛發(fā)生長(zhǎng)有密切關(guān)系，可影響動(dòng)物皮毛的季節(jié)性換毛。初步研究還表明，褪黑素可以改善腸易激綜合征病人的癥狀，因而，其在醫(yī)藥、食品等行業(yè)的應(yīng)用前景受到廣泛關(guān)注。
制備[1]
(1)向反應(yīng)容器中加入500mL乙腈，100g鄰苯二甲酰亞胺和281.8g碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0min，然后向其中加入115.19g的1,3-二氯丙烷和152.82g碘化鈉；加料畢，逐漸升溫至58～60℃并在此溫度范圍攪拌反應(yīng)5.5h，取樣監(jiān)測(cè)原料鄰苯二甲酰亞胺反應(yīng)完全；
然后稱取132.68g的乙酰乙酸乙酯，緩慢滴加至上述反應(yīng)液中，加料畢，繼續(xù)反應(yīng)7h；將反應(yīng)液降至室溫，過(guò)濾，母液濃縮至干得化合物Ⅰ純品207.5g，收率為96.2％。
(2)向反應(yīng)容器中加入100mL水和121g的對(duì)甲氧基苯胺，降溫至0～5℃；向其中緩慢加入298.53g的濃鹽酸(36wt％)，加料畢，攪拌30min；然后于0～5℃向上述反應(yīng)液中緩慢滴加174.57g的亞硝酸鈉水溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為43％)，繼續(xù)攪拌30min，得到對(duì)甲氧基苯基重氮鹽；
將207.5g化合物Ⅰ溶于540g甲醇中，于0～5℃條件下將溶解于甲醇中的化合物Ⅰ緩慢加入到上述對(duì)甲氧基苯基重氮鹽的反應(yīng)液中；加料畢，使反應(yīng)液逐漸升至室溫并加熱至45～50℃，反應(yīng)7h；取樣監(jiān)測(cè)原料反應(yīng)完全，降至室溫，加入500g二氯甲烷萃取，分出有機(jī)層，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮至干得化合物Ⅱ純品248.5g，收率為96.9％。
(3)向反應(yīng)容器中加入200g水和40g氫氧化鈉，待其溶清于室溫條件下，加入248.5g的化合物Ⅱ，升溫至88～90℃，反應(yīng)5～6h；然后將反應(yīng)液降至10～20℃，緩慢加入192.4g的濃鹽酸(36wt％)，加料畢，升溫至107～110℃，反應(yīng)1～2h；然后將反應(yīng)液降至室溫，過(guò)濾，濾餅用水洗滌至中性，于55℃烘干得化合物Ⅲ純品119.3g，收率為99.0％。
(4)向反應(yīng)容器中加入105g二氯甲烷和119.3g化合物Ⅲ，攪拌溶清后緩慢加入73.8g乙酰氯；于25～30℃反應(yīng)1～2h；反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾，濾餅用二氯甲烷洗滌，于55℃烘干得褪黑素純品143.2g，收率為98.3％。
對(duì)制備得到的褪黑素結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，具體如下：
1HNMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm),8.1(brs,1H),7.3(d,1H),7.05(brs,2H),6.9(d,1H),5.6(brs,1H),3.9(s,3H),3.6(m,2H),2.95(t,2H),1.95(s,3H)。
含量測(cè)定[2]
褪黑素片（片劑，標(biāo)示服用量為每次1片，高效液相色譜色譜法測(cè)定結(jié)果本品每片含褪黑素8.5mg）.
取1片量?jī)?nèi)容物，研磨均勻，放入100mL具塞燒瓶中，用乙醚稀釋至刻度，燒瓶塞緊，在磁力攪拌機(jī)上攪拌15min后，過(guò)濾，靜置片刻，取2mL乙醚萃取液在25mL容量瓶中，40℃水浴蒸發(fā)至干。加入2mL1g/L的Fe(Ⅲ)?鄰菲羅啉試劑，加入5mL的pH4.6醋酸鈉?醋酸緩沖溶液，70℃水浴加熱10min，冷卻至室溫，觀察有紅色渾濁產(chǎn)生，由此可判斷樣品中含有褪黑素。用蒸餾水稀釋至刻度，在510nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得其中褪黑素含量為8.36mg。
參考文獻(xiàn)
[1][中國(guó)發(fā)明]CN201911242727.X褪黑素的制備方法
[2][中國(guó)發(fā)明]CN201310207854.2一種褪黑素的測(cè)定方法