背景及概述^[1-2]

托比司他用于治療痛風(fēng)的慢性高尿酸血癥，與傳統(tǒng)藥物別嘌呤醇(嘌呤類似物)相比，不會影響嘌呤及吡啶代謝及其酶的活性，其降低尿酸的作用更強，不需要大劑量重復(fù)給藥，安全性更好，而2-氰基-4-吡啶羧酸甲酯為合成托比司他的重要原料。

純度檢測^[1]

2-氰基-4-吡啶羧酸甲酯合成過程中所產(chǎn)生的雜質(zhì)主要有異煙酸甲酯和甲基異煙酸N-氧化物。

2-氰基-4-吡啶羧酸甲酯與主要雜質(zhì)異煙酸甲酯極性相近，CN201610560075.4提供一種采用等度洗脫實現(xiàn)2-氰基-4-吡啶羧酸甲酯與相鄰雜質(zhì)峰能完全分離，且峰型佳的方法，實現(xiàn)對2-氰基-4-吡啶羧酸甲酯含量的準確分析。本發(fā)明涉及的一種2-氰基-4-吡啶羧酸甲酯與其主要雜質(zhì)完全分離的高效液相色譜純度檢測方法，包括以下步驟：

a、制備供試品溶液：取2-氰基-4-吡啶羧酸甲酯，用流動相或甲醇溶解，制成濃度為0.5mg/ml～1.2mg/ml的溶液，作為供試品溶液。

b、制備雜質(zhì)對照品溶液：取異煙酸甲酯和甲基異煙酸N-氧化物，用流動相或甲醇溶解，制成濃度為0.5mg/ml～1.2mg/ml的溶液，作為雜質(zhì)對照品溶液。

c、采用高效液相色譜分別對供試品溶液和雜質(zhì)對照品溶液進行檢測，檢測條件為：色譜柱為C18柱；流動相為甲醇-緩沖鹽，甲醇與緩沖液的體積比為10％：90％～90％：10％；進樣量為：20ul，流速為0.5ml/min～1.5ml/min；柱溫為10℃～40℃；檢測波長為200nm～300mn。

d、按峰面積歸一化法計算異煙酸甲酯和甲基異煙酸N-氧化物的峰面積。

制備^[2]

向250ml三口瓶中加入甲基異煙酸-N-氧化物(15.31g，0.1mol)和200ml乙腈攪拌全溶后，加入三乙胺(15g，0.15mol)、三甲基硅氰(29.76g，0.3mmol)后氮氣保護回流反應(yīng)20小時，TLC檢測反應(yīng)結(jié)束。將溶劑減壓蒸餾至干，殘留物上硅膠柱層析，用二氯甲烷-甲醇(50：1)洗脫，得到白色結(jié)晶體收率13.48g，83.14％。¹HNMR(600MHz，DMSO-d6，δppm)：4.03(s，3H，)，8.11(d，1H，)，7.76(s，1H)，8.26(s，1H)，8.89(d，1H)。

參考文獻

[1][中國發(fā)明]CN201610560075.4一種2-氰基-4-吡啶羧酸甲酯與其主要雜質(zhì)完全分離的高效液相色譜純度檢測方法

[2] [中國發(fā)明] CN201610150069.1 一種托匹司他雜質(zhì)的合成方法