背景及概述[1][2]
替可克肽(Tetracosactide)為人工合成的24肽促皮質(zhì)素類似物，氨基酸的排列順序和天然促皮質(zhì)素(人、牛、豬)氨基端24個(gè)氨基酸相同，與天然ACTH具有相同的生理活性。最突出的特點(diǎn)是一般情況下不會(huì)產(chǎn)生抗體反應(yīng)，無(wú)嚴(yán)重副作用，特別適用于對(duì)于天然豬促皮質(zhì)素有過(guò)敏反應(yīng)或無(wú)效的患者。能誘導(dǎo)腎上腺增生，刺激腎上腺皮質(zhì)激素，尤其是氫化可的松（皮質(zhì)醇）和某些鹽皮質(zhì)激素如皮質(zhì)酮的分泌，也能刺激雄激素的分泌，但作用較弱。對(duì)醛固酮的分泌幾無(wú)影響。半衰期為3小時(shí)。2008年FDA批準(zhǔn)諾華的替可克肽用于腎上腺皮質(zhì)功能減退癥的診斷。目前RandboudUniversity正在研究其對(duì)特發(fā)膜性腎病的治療作用。目前替可克肽的合成主要采用全液相合成方法進(jìn)行。該方法步驟繁多，合成起來(lái)花費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，并且需要用到昂貴的催化劑和高壓設(shè)備，因此成本高、雜質(zhì)多和操作危險(xiǎn)、收率低等缺點(diǎn)。有報(bào)道采用Z保護(hù)策略逐個(gè)合成，每步均采用氫化脫除保護(hù)基，步驟長(zhǎng)，操作繁瑣以及成本高，收率低。逐個(gè)偶聯(lián)而導(dǎo)致的絲氨酸易消旋問(wèn)題，在純化過(guò)程中難以純化。
藥理作用[3]
替可克肽作用與促腎上腺皮質(zhì)激素相同，可刺激腎上腺皮質(zhì)分泌皮質(zhì)激素（主要是皮質(zhì)醇），因此對(duì)腎上腺皮質(zhì)功能嚴(yán)重低下者無(wú)效。
藥代動(dòng)力學(xué)[3]
替可克肽為人工合成的24個(gè)氨基酸組成的多肽。其結(jié)構(gòu)和促腎上腺皮質(zhì)激素的第1個(gè)～第24個(gè)氨基酸相同。靜脈給藥可迅速升高血皮質(zhì)醇水平，需維持血皮質(zhì)醇濃度時(shí)應(yīng)持續(xù)靜脈點(diǎn)滴給藥。肌內(nèi)注射，血皮質(zhì)醇于注射后1h達(dá)到高峰。以后可使升高的皮質(zhì)醇維持約24h。
適應(yīng)證[3]
替可克肽與促腎上腺皮質(zhì)激素的作用相同。因此，其臨床應(yīng)用范圍與促腎上腺皮激素相似。由于相同的用藥指征多選用作用更強(qiáng)、副作用較小的皮質(zhì)激素。因此，替可克肽目前僅用于部分克羅恩病或潰瘍性結(jié)腸炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等少數(shù)疾病。長(zhǎng)期應(yīng)用皮質(zhì)激素治療的患者可聯(lián)合使用替可克肽，以預(yù)防腎上腺萎縮。替可克肽和促腎上腺皮質(zhì)激素一樣也用于腎上腺皮質(zhì)功能檢查。但長(zhǎng)效替可克肽一般不作為標(biāo)準(zhǔn)的腎上腺皮質(zhì)功能試驗(yàn)用藥。
禁忌證[3]
不宜用于結(jié)核病、高血壓、糖尿病、潰瘍病和孕婦。
不良反應(yīng)[3]
與促腎上腺皮質(zhì)激素相同。大量使用可引起水鈉潴留和高血壓、精神異常、糖耐量異常、蛋白質(zhì)消耗、骨質(zhì)疏松、低血鉀、月經(jīng)異常、色素沉著和痤瘡等。少數(shù)患者可對(duì)替可克肽出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，但發(fā)生率較促腎上腺皮質(zhì)激素少。
用法用量[3]
2歲以內(nèi)每2～8天250μg；5～12歲每2～8天為250μg～1mg。劑量應(yīng)根據(jù)不同疾病以及個(gè)體的反應(yīng)而定。
制備[1]
替可克肽制備如下：
步驟1：序列如SEQIDNo.1所示的多肽-固相載體
H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Val-Lys(Boc)-Val-Tyr(tBu)-Pro-2-CTC肽樹(shù)脂的合成
稱取替代度為0.4mmol/g的2-CTC樹(shù)脂50g（20mmol），加入到固相反應(yīng)柱中，用DMF洗滌2次，用DMF溶脹樹(shù)脂30分鐘后，取13.5gFmoc-Pro-OH（40mmol）用20mlDMF溶解，冰水浴下加入14.1mlDIPEA（80mmol）活化3分鐘后，加入上述裝有樹(shù)脂的反應(yīng)柱中，反應(yīng)2小時(shí)后，加入15ml無(wú)水甲醇封閉0.5小時(shí)。用DMF洗滌3次，DCM洗3次，甲醇收縮抽干，得到Fmoc-Pro-2-CTC樹(shù)脂52.4g，檢測(cè)替代度為0.21mmol/g稱取替代度為0.21mmol/g的Fmoc-Pro-CTC樹(shù)脂50g，加入到固相反應(yīng)柱中，用DMF洗滌2次，用DMF溶脹樹(shù)脂30分鐘后，加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脫保護(hù)5和10分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂6次，采用茚三酮檢測(cè)樹(shù)脂有顏色。稱取Fmoc-Tyr(tBu)-OH9.2g和2.97gHOBt，用50mlDMF溶解，冰水浴下加入DIPCDI3.42ml活化5分鐘，加入到反應(yīng)柱中，室溫反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)終點(diǎn)采用茚三酮檢測(cè)來(lái)判斷（如果樹(shù)脂無(wú)色透明，則反應(yīng)完全；如果樹(shù)脂顯色則繼續(xù)反映1小時(shí)。下同），反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂3次。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脫保護(hù)5和10分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂6次，采用茚三酮檢測(cè)樹(shù)脂有顏色。采用相同的方法偶聯(lián)Fmoc-Val-OH，F(xiàn)moc-Lys(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Val-OH，F(xiàn)moc-Pro-OH，F(xiàn)moc-Arg(Pbf)-OH，F(xiàn)moc-Arg(Pbf)-OH，F(xiàn)moc-Lys(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Lys(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Gly-OH，F(xiàn)moc-Val-OH，F(xiàn)moc-Pro-OH，F(xiàn)moc-Lys(Boc)-OH。當(dāng)Fmoc-Lys(Boc)-OH偶聯(lián)結(jié)束后用DMF洗滌樹(shù)脂3次。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脫保護(hù)5和10分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂6次，采用茚三酮檢測(cè)樹(shù)脂有顏色。得到序列如SEQIDNo.1所示的多肽-固相載體：
H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Val-Lys(Boc)-Val-Tyr(tBu)-Pro-2-CTC肽樹(shù)脂，待用。
步驟2：序列如SEQIDNo.2所示的第二多肽
Boc-Ser(Trt)-Tyr(tBu)-Ser(Psi(Me，Me)pro)-Met-Glu(OtBu)-His(Trt)-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Gly-OH的制備
稱取替代度為0.5mmol/g的2-CTC樹(shù)脂40g（20mmol），加入到固相反應(yīng)柱中，用DMF洗滌2次，用DMF溶脹樹(shù)脂30分鐘后，取5.94gFmoc-Gly-OH（40mmol）用70mlDMF溶解，冰水浴下加入14.1mlDIPEA（80mmol）活化3分鐘后，加入上述裝有樹(shù)脂的反應(yīng)柱中，反應(yīng)2小時(shí)后，加入15ml無(wú)水甲醇封閉0.5小時(shí)。用DMF洗滌3次，DCM洗3次。
加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脫保護(hù)5和10分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂6次，采用茚三酮檢測(cè)樹(shù)脂有顏色。稱取Fmoc-Trp(Boc)-OH21.1g和5.94gHOBt，用90mlDMF溶解，冰水浴下加入DIPCDI6.85ml活化5分鐘，加入到反應(yīng)柱中，室溫反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)終點(diǎn)采用茚三酮檢測(cè)來(lái)判斷（如果樹(shù)脂無(wú)色透明，則反應(yīng)完全；如果樹(shù)脂顯色則繼續(xù)反映1小時(shí)。下同），反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂3次。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脫保護(hù)5和10分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂6次，采用茚三酮檢測(cè)樹(shù)脂有顏色。采用相同的方法偶聯(lián)Fmoc-Arg(Pbf)-OH，F(xiàn)moc-Phe-OH，F(xiàn)moc-His(Trt)-OH，F(xiàn)moc-Glu(OtBu)-OH，F(xiàn)moc-Met-OH。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脫保護(hù)5和10分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂6次，采用茚三酮檢測(cè)樹(shù)脂有顏色。稱取Fmoc-Tyr(tBu)-Ser(Psi(Me，Me)pro)-OH39.5g和8.9gHOBt，用100mlDMF溶解，冰水浴下加入DIPCDI10.27ml活化5分鐘，加入到反應(yīng)柱中，室溫反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)終點(diǎn)采用茚三酮檢測(cè)來(lái)判斷（如果樹(shù)脂無(wú)色透明，則反應(yīng)完全；如果樹(shù)脂顯色則繼續(xù)反映1小時(shí)。下同），反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂3次。加入20%哌啶/DMF（V：V）溶液100ml，脫保護(hù)5和10分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂6次，采用茚三酮檢測(cè)樹(shù)脂有顏色。采用相同的方法偶聯(lián)Boc-Ser(Trt)-OH，反應(yīng)結(jié)束，DMF洗3次，DCM洗3次，甲醇收縮，抽干，得到第二多肽-第二固相載體：
Boc-Ser(Trt)-Tyr(tBu)-Ser(Psi(Me，Me)pro)-Met-glu(OtBu)-His(Trt)-Phe-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Gly-2-CTC肽樹(shù)脂79.4g。
將得到的第二多肽-第二固相載體79.4g，加入預(yù)先配置好的裂解液TFE：DCM=1：4（V：V）800ml，室溫裂解2.5小時(shí)，過(guò)濾，30mlDCM洗滌，合并濾液，減壓濃縮至80ml，滴加到800ml無(wú)水乙醚析出白色固體，離心抽干得到白色固體38.1g，收率80.1%。HPLC純度為89.2%。
步驟3：替可克肽肽樹(shù)脂的制備：
稱取步驟2得到的11.2g第二多肽精肽，HOAt0.61g，用50mlDCM溶解，冰水浴下加入0.68mlDIPCDI活化4分鐘，加入到步驟2得到的多肽-固相載體：
H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Pro-Val-Lys(Boc)-Val-Tyr(tBu)-Pro-2-CTC肽樹(shù)脂（2mmol）中，室溫反應(yīng)3小時(shí)，反應(yīng)終點(diǎn)采用茚三酮檢測(cè)來(lái)判斷（如果樹(shù)脂無(wú)色透明，則反應(yīng)完全；如果樹(shù)脂顯色則繼續(xù)反映1小時(shí)。下同），反應(yīng)結(jié)束后，用DMF洗滌樹(shù)脂3次，DCM洗滌3次，甲醇收縮，抽干，得到替可克肽肽樹(shù)脂12.4g，樹(shù)脂增重率85.1%。
主要參考資料
[1] CN201310100839.8替可克肽的制備方法
[2] CN201610927175.6一種醋酸替可克肽的純化方法
[3] 替可克肽說(shuō)明書