Edman降解（埃德曼降解）法，是由菲爾•埃德曼（Pehr Edman）首先創(chuàng)立用于肽鏈或蛋白質(zhì)中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman降解法檢測的原理非常簡單，在堿性條件下反應，用異硫氰酸苯酯（Phenylisothiocyanate, PITC）與待檢測的蛋白質(zhì)（多肽）的N-端氨基生成苯氨基硫甲酰（PTC）的衍生物，然后處理-關(guān)環(huán)-選擇性切斷肽鏈N-端，得到N-端氨基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接著用有機溶劑萃取衍生物，在酸的作用下，不穩(wěn)定的衍生物轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的的乙內(nèi)苯酰硫脲（PTH）衍生物，余下肽鏈中的酰胺鍵不受影響。通過用HPLC或電泳法分析生成的乙內(nèi)酰苯硫脲氨基酸（PTH-氨基酸），可以鑒定出氨基酸類別。重復氨基酸鑒定反應可以達到對N端氨基酸按照從N端到C端的方向依次對氨基酸序列進行分析。對于序列較長的蛋白質(zhì)（多肽），還可以將樣品先切成小的肽段，先對肽段序列分析，再將肽段信息進行拼接即可獲得完整蛋白質(zhì)的序列信息。
1. PITC與所有氨基酸殘基的反應產(chǎn)率和回收率高，因此副產(chǎn)物少，可通過色譜進行準確鑒定； 2. 反應時間快，對于大多數(shù)氨基酸殘基來說，30min耦合時間，5min切割反應時間即可； 3. 反應后的肽鏈仍然是完整的，可用Edman降解法重復測定新生的N末端氨基酸。
1. 樣品純度需 >90%, 鹽離子含量在50mmol/L之內(nèi)，不含SDS等變性劑，N端必須是均一的高純樣品； 2. 10Pmol 樣品可以測定20 aa； 3. 液體樣品不能含有蛋白酶，建議盡早測試，防止時間太長容易降解； 4. 轉(zhuǎn)膜樣品在轉(zhuǎn)膜前不宜放置太久以防樣品擴散，轉(zhuǎn)膜后可密封保存3-6個月, 建議使用Coomassie R-250進行染色，電泳緩存液建議使用CAPS buffer； 5. 樣品無信號峰是，建議蛋白進行N-端封閉； 6. 建議整個反應過程中盡可能使用高純buffer。
百泰派克生物科技采用島津公司推出的PPSQ系列儀器實現(xiàn)對蛋白或者多肽樣品N端氨基酸序列的分析，可以分析N端30個以上的氨基酸。以下是我們對某一蛋白藥物進行分析的實際色譜結(jié)果，該項目對樣品中蛋白藥物的前15個氨基酸進行了分析。從下圖（第15個氨基酸的色譜圖）可以看出，色譜峰值仍然非常高，可以得到非常準確的結(jié)果。
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