"CA46細(xì)胞:人burkitt淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:該細(xì)胞源自Burkitt's淋巴瘤患者的B淋巴細(xì)胞,EBNA、Fc陰性。 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:懸浮 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞培養(yǎng)方面注意的幾點(diǎn):無菌意識要強(qiáng):實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置,其它個(gè)人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域,一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基:不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同,甚至不同的文獻(xiàn)可能對相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時(shí)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,有文獻(xiàn)就選用neurobase培養(yǎng)基,而我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴模@種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,此時(shí),我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計(jì)時(shí),一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因?yàn)闀斐沙恋砦镏@著增多,且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細(xì)胞的影響。 凍存和復(fù)蘇的原則:慢凍快融》當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下變化:細(xì)胞器脫水,細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細(xì)胞逐步脫水,細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會造成細(xì)胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。慢凍程序》1.標(biāo)準(zhǔn)程序:采用細(xì)胞凍存器》當(dāng)溫度在-25℃以上時(shí),1~2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),5~10℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-100℃時(shí),可迅速放入液氮中。2.簡易程序:將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內(nèi),紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2℃的速度,在40min內(nèi)降至液氮表面過夜,次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序:冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽長期儲存。細(xì)胞凍存方法:1.預(yù)先配制凍存液》(1)8%DMSO+細(xì)胞生長液(92%血清)2.取對數(shù)生長期細(xì)胞,經(jīng)胰酶消化后,加入適量凍存液,用吸管吹打制成細(xì)胞懸液(1×10(6)~5×10(6)細(xì)胞/ml)。3.加入1ml細(xì)胞于凍存管中,密封后標(biāo)記冷凍細(xì)胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細(xì)胞的復(fù)蘇方法:1.快速解凍》凍存細(xì)胞從液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在1分鐘內(nèi)全部融化(不要超過3分鐘)。2.解凍后的細(xì)胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng),24小時(shí)后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液,以去除DMSO。3.如果細(xì)胞對冷凍保護(hù)劑特別敏感解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑,然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)問題總結(jié):冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37°C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預(yù)防冷凍管之爆裂;細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí),是否應(yīng)馬上去除DMSO?除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外,絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞),在解凍之后,應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題;可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活;可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會造成細(xì)胞無法存活;培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2?或根本沒有影響?一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí),則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?除于特殊篩選系統(tǒng)中外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。 RT4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-118-MG細(xì)胞、OLN 93細(xì)胞、SVOG細(xì)胞 H82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRTL-5細(xì)胞、H596細(xì)胞、OCM-1細(xì)胞 OE-33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MEC1細(xì)胞、Hs 934.T細(xì)胞、KM12 SM細(xì)胞 NCI H747細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKL細(xì)胞、HeLa-S3細(xì)胞、Colon 26細(xì)胞 EBTr (NBL-4)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep3B細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-134-VI細(xì)胞、HHL5細(xì)胞 H1693細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-14細(xì)胞、QGY7703細(xì)胞、NE1-E6E7細(xì)胞 UWB1.289+BRCA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Capan 1細(xì)胞、MDA-MB-435細(xì)胞、SUM149細(xì)胞 C3H/10T1/2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIMT-1細(xì)胞、SF763細(xì)胞、RTMC細(xì)胞 Vero 76 clone E-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK HEP 01細(xì)胞、JEKO細(xì)胞、SKNSH細(xì)胞 RGC6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF-295細(xì)胞、MFE 296細(xì)胞、KYSE 180細(xì)胞 H4-II-E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hmy.2 CIR細(xì)胞、PANC 203細(xì)胞、624細(xì)胞 J82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y1細(xì)胞、SW-480細(xì)胞、CAKI 1細(xì)胞 OEC19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE671細(xì)胞、PE/CA-PJ34細(xì)胞、Mia PACA 2細(xì)胞 Baby Hamster Kidney 21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2087細(xì)胞、DHBE細(xì)胞、H520細(xì)胞 H-2198細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMS-11細(xì)胞、NCCIT細(xì)胞、JJN-3細(xì)胞 6-10B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-ChA-1細(xì)胞、OVCA8細(xì)胞、SU-86-86細(xì)胞 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