"NCI-H1395細(xì)胞：人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系

細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁

細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)

細(xì)胞傳代方法：１：２傳代；５-６天傳代一次。

細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過(guò)大，營(yíng)養(yǎng)障礙，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過(guò)程稱(chēng)之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株)，可以進(jìn)行細(xì)胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料，便于實(shí)驗(yàn)?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液；２)向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進(jìn)行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，應(yīng)立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶?jī)?nèi)加入Hanks液少量，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過(guò)猛損傷細(xì)胞；６)用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；７)細(xì)胞培養(yǎng)換液時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)要求來(lái)確定。一般２～３d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液。待細(xì)胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴(kuò)大培養(yǎng)或換成維持液?！咀⒁馐马?xiàng)】１)掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；２)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。

懸浮細(xì)胞不容易轉(zhuǎn)染：懸浮細(xì)胞是指細(xì)胞生長(zhǎng)不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)，如淋巴細(xì)胞。在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常會(huì)遇到懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，其和貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染還是有很大不同的。目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室用的是脂質(zhì)體類(lèi)的轉(zhuǎn)染試劑，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是基于電荷吸引原理，先形成脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物，散布在細(xì)胞周?chē)缓笸ㄟ^(guò)細(xì)胞的內(nèi)吞作用，將目的基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)，而脂質(zhì)體復(fù)合物與貼壁細(xì)胞的接觸機(jī)會(huì)比懸浮細(xì)胞高出很多倍，所以，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時(shí)懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率要明顯低于貼壁細(xì)胞。其次，脂質(zhì)體試劑的毒性較大，這就使得懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染更為困難了。另外，懸浮細(xì)胞不易培養(yǎng)，易死亡，也給細(xì)胞轉(zhuǎn)染造成了一定的困難。為了提高懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，可以使用非脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑，如納米材料的。也可以使用電轉(zhuǎn)染方法，針對(duì)懸浮細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞還是挺不錯(cuò)的，電擊對(duì)細(xì)胞有一定的損傷，選用具有細(xì)胞膜修復(fù)功能的電轉(zhuǎn)染試劑，可以將電擊對(duì)細(xì)胞的傷害降到最低，懸浮細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染，選對(duì)試劑及良好的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境才是關(guān)鍵。

我?？吹揭粋€(gè)比較復(fù)雜的四步消化法，這個(gè)挺有意思，我也是次聽(tīng)說(shuō)，應(yīng)該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來(lái)的方法，很有參考價(jià)值。但我估計(jì)這個(gè)方法可能對(duì)付少數(shù)非常怪異的細(xì)胞才需要這么復(fù)雜的程序。我目前養(yǎng)過(guò)的近３００株細(xì)胞里面，還沒(méi)遇到這么怪異的。比如Caco２其實(shí)是很好消化的細(xì)胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點(diǎn)成片分布。不要以為成片分布是自己沒(méi)養(yǎng)好，這個(gè)視細(xì)胞而定。如果和標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)不一致，那可能是自己沒(méi)消化好導(dǎo)致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細(xì)胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細(xì)胞的特性，是因?yàn)橘N壁過(guò)程中重新聚集了。這個(gè)時(shí)候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細(xì)胞之后會(huì)對(duì)你越來(lái)越不好；比較難消化的細(xì)胞(潤(rùn)洗方法５min還不能消化)，就以colon cancer為例，比如HCT１５, LS４１１和KM１２，這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般１００ mm dish，一次最多加入５００ul，就足夠了，一般我加３００ul。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過(guò)５min，即可見(jiàn)細(xì)胞成片移動(dòng)，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候，比如tsDC細(xì)胞，但也只要用少量胰酶孵育，３min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。

NCI-H520細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs888T細(xì)胞、DC2.4細(xì)胞、HIEC-6細(xì)胞

COV 504細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HGBEC細(xì)胞、NCI-H520細(xì)胞、L-132細(xì)胞

P3X63NS1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE 30細(xì)胞、RSC 96細(xì)胞、VP 267細(xì)胞

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NTera 2/cl.D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1155細(xì)胞、OVCAR432細(xì)胞、ssMCF-7細(xì)胞

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FK81細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TK-10細(xì)胞、DMS53細(xì)胞、A375SM細(xì)胞

CBRH7919細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHP100細(xì)胞、MDA-PCa-2b細(xì)胞、BT 325細(xì)胞

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KBM7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C3A細(xì)胞、MDA-MB-231-luc細(xì)胞、HS-766-T細(xì)胞

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MDA-MB-435 S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA231-LM2細(xì)胞、DHL6細(xì)胞、INS1E細(xì)胞

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U14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IFRS1細(xì)胞、DR2R 1610細(xì)胞、H-1838細(xì)胞

UT-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCCC-9810細(xì)胞、Panc_04_03細(xì)胞、FL62891細(xì)胞

OCI-Ly03細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：L929細(xì)胞、A-253細(xì)胞、MC/9細(xì)胞

ATN1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NOR 10細(xì)胞、GM-215細(xì)胞、H-727細(xì)胞

HEK 293FT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CBRH7919細(xì)胞、HBE細(xì)胞、IAR 20細(xì)胞

HPAEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Colon-38細(xì)胞、IMR-90細(xì)胞、hRPTC細(xì)胞

Eca 109細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HO8910/PM細(xì)胞、PC 12細(xì)胞、SNU869細(xì)胞

P3JHR1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CEMC7細(xì)胞、ECC-10細(xì)胞、JB6Cl30細(xì)胞

RT-112細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C32-mel細(xì)胞、HeLa/DDP細(xì)胞、RCC10細(xì)胞

B-cell with DC Morphology細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCL2細(xì)胞、Caco-2/ATCC細(xì)胞、CA46細(xì)胞

TOG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Human Epidermoid carcinoma #2細(xì)胞、H441細(xì)胞、CCRF-SB細(xì)胞

Tregs細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Epstein-Barr-3細(xì)胞、SCC9細(xì)胞、SKNBE2細(xì)胞

624mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO206細(xì)胞、K-562細(xì)胞、HUT-28細(xì)胞

HIT T15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SuDHL 8細(xì)胞、DH82細(xì)胞、TCMK-1細(xì)胞

NGEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Duke University 145細(xì)胞、TCam-2細(xì)胞、SF-763細(xì)胞

LCMS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KRC-Y細(xì)胞、Tj-905細(xì)胞、CT-26細(xì)胞

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Daudi細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 837細(xì)胞、SK-Mel 1細(xì)胞、NKM1細(xì)胞

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細(xì)胞

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AMC-HN-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BEL7405細(xì)胞、HMSC細(xì)胞、SKMES-1細(xì)胞

KPL-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1417細(xì)胞、SW626細(xì)胞、BMDC細(xì)胞

NCI-H209細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RA.1細(xì)胞、H1693細(xì)胞、KBM-7細(xì)胞

OVCAR8/ADR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CTLA4 Ig-24細(xì)胞、RBL-2H3細(xì)胞、LN229細(xì)胞

Cloudman S91 melanoma clone M-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：451Lu細(xì)胞、BNL CL.2細(xì)胞、HBL-1 [Human diffuse large B-cell lymphoma]細(xì)胞

Pa14C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DLD 1細(xì)胞、HL7702細(xì)胞、RPMI no. 8226細(xì)胞

BALL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HepG2細(xì)胞、SACC-LM細(xì)胞、LCLC-103H細(xì)胞

COR-L 105細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHP212細(xì)胞、MDCKII細(xì)胞、HCCLM3細(xì)胞

alphaTC clone 6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：L細(xì)胞、PK(15)細(xì)胞、Hs 683.T細(xì)胞

M-07e細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KP-2細(xì)胞、TGW-nu-1細(xì)胞、NCI-H2108細(xì)胞

TK 10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC-116細(xì)胞、AG06814-N細(xì)胞、CAL851細(xì)胞

B958細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：J774A.1細(xì)胞、C4-2 Bone metastatic細(xì)胞、NCI-H2195細(xì)胞

OCI/AML-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDST8細(xì)胞、293FT細(xì)胞、He La細(xì)胞

SK-MEL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BV173細(xì)胞、ACC-M細(xì)胞、MDA-436細(xì)胞

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VeroC1008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細(xì)胞、CEMO-1細(xì)胞、EST81細(xì)胞

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H-661細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PCI-4M細(xì)胞、MKN7細(xì)胞、HCC1359細(xì)胞

SK-OV-433細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE-450細(xì)胞、WIL2S細(xì)胞、DMS 273細(xì)胞

Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs729T細(xì)胞、BMU-S1細(xì)胞、Rca-B細(xì)胞

PC 12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI-2650細(xì)胞、RPMI 6666細(xì)胞、SKN-SH細(xì)胞

FAO-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LS 174 T細(xì)胞、CORL23細(xì)胞、NCI-H2330細(xì)胞

HCC366細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-363細(xì)胞、KYSE70細(xì)胞、GM00637H細(xì)胞

B16-F10-BL6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCAR.4細(xì)胞、Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細(xì)胞、NP69細(xì)胞

MGC-803細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NMC-G1細(xì)胞、Leukemic 1210細(xì)胞、SKMEL-24細(xì)胞

Bowes melanoma cells細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-1187細(xì)胞、P3X63 Ag8細(xì)胞、MV-3細(xì)胞

OVCA 433細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Japanese Tissue Culture-28細(xì)胞、MLE-12細(xì)胞、BIU87細(xì)胞

P3X63NS1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE 30細(xì)胞、KNS81細(xì)胞、SCaBER細(xì)胞

HLFa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs-852-T細(xì)胞、BT483細(xì)胞、WEHI 164 TC細(xì)胞

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