"NKL Thawing人NK細胞淋巴瘤細胞系
細胞背景資料：NK細胞淋巴瘤/白血??；男性
細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣
NKL Thawing人NK細胞淋巴瘤細胞系
細胞生長：懸浮
培養(yǎng)細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術。細胞凍存在-１９６℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融?！緝龃婕毎浚?選對數增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前１d換液；２)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數，使細胞密度達５×１０／ml左右密度，離心，去上清；３)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑１０％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外；４)分裝于無菌凍存管中，每管加１.５m懸液；５)旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記；６)凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min時間內，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷。【復蘇細胞】１)從罐中取出凍存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不時搖動，使其急速融化，３０～６０s內完成；３)凍存管用７０％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加１０ml培養(yǎng)液；４)低速離心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；５)用培養(yǎng)液適當稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶３７℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數量要充分，密度應達到１０／ml，在融后稀釋２０倍時，仍能保持５×１０／ml數量。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)好與不好至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據實際情況把握）。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
NKL Thawing人NK細胞淋巴瘤細胞系
細胞生長特性：懸浮
細胞傳代時消化的問題：可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)好與不好最至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現自己的細胞，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細胞為例）；具體操作：１)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗１-２遍，（這是前奏，即為步，目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。２)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了。）３)吸干凈瓶內剩余液體，加入０.３ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打２-３遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用２ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比。）這是第三步。４)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據實際情況你自己把握）。這是第四步。其實還可以有第五步，對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能限度地將胰酶對細胞的損傷降到最低，保證細胞的狀態(tài)能夠。當然了，如果細胞是屬于那種很容易消化的細胞，像RAW２６４.７，僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養(yǎng)起來做比較，去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。將細胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外，還有一個更重要的作用就是，可以程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài)，不成片不連體。
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
C4-2 Bone metastatic細胞系相關產品：H-82細胞、SW-527細胞、NBL-7細胞
HLE B-3細胞系相關產品：M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細胞、Ly1細胞、CZ-1細胞
MUGCHOR1細胞系相關產品：no.11細胞、HCCC-9810細胞、WIL2S細胞
NBL-5細胞系相關產品：RPMI no. 8226細胞、PL-12細胞、32D clone 3細胞
MDA134細胞系相關產品：RBL 1細胞、H-1993細胞、MDCK細胞
HCC0202細胞系相關產品：B-CPAP細胞、HT-29/CX-1細胞、OV-1063細胞
K562細胞系相關產品：SUM52細胞、LWnt-3A細胞、EO771細胞
C26細胞系相關產品：LS123細胞、TNC-1B12B4細胞、H9c2細胞
A549ATCC細胞系相關產品：H-1435細胞、SJCRH30細胞、RGB細胞
NCIH1694細胞系相關產品：GC1-SPG細胞、S3-HeLa細胞、Hs 636 T細胞
UM-UC14細胞系相關產品：NCIH510細胞、OVCAR 8細胞、Psi2-DAP細胞
RL952細胞系相關產品：MV-4:11細胞、IA-LM細胞、Sf-21細胞
NTC-200細胞系相關產品：Panc-05.04細胞、MDAMB-231細胞、K7M2 wt細胞
Hs_578t細胞系相關產品：NOZC-1細胞、MILE SVEN 1細胞、NCIH1876細胞
RA-FLSs細胞系相關產品：HCC0044細胞、PLCPRF5細胞、MC57G細胞
TE6細胞系相關產品：MEF細胞、TE10細胞、DMS-273細胞
Z310細胞系相關產品：NCI660細胞、NCI-H2122細胞、TE354.T細胞
SUDHL-1細胞系相關產品：NCI-SNU-119細胞、JIMT-1細胞、COS1細胞
P31 FUJ細胞系相關產品：MDA-MB453細胞、PAMC82細胞、NT2/D1細胞
RBL-I細胞系相關產品：PFSK1細胞、B16細胞、Institute for Medical Research-32細胞
Anip-973細胞系相關產品：D 407細胞、HR-8348細胞、RKOE6細胞
HOEC細胞系相關產品：HT(H9)細胞、GDM1細胞、EA. hy 926細胞
DHL10細胞系相關產品：H1793細胞、TB-1 Lu細胞、32D CL3細胞
EOL1細胞系相關產品：H-2126細胞、NCI-SNU-475細胞、CMT.64細胞
Lung cancer-1/squamous細胞系相關產品：UM-UC-3細胞、QBC-939細胞、H220細胞
MB49細胞系相關產品：HOC細胞、SF-763細胞、Mhh-Call 2細胞
NKL Thawing人NK細胞淋巴瘤細胞系
MDA-MB-231細胞系相關產品：KYSE70細胞、MLA-144細胞、CTX TNA2細胞
32Dc3細胞系相關產品：L-M(TK-)細胞、BMSCs（mBMSCs）細胞、BE(2)M-17細胞
H-2196細胞系相關產品：HTori 3細胞、PANC3.27細胞、C1R細胞
LTEPa2細胞系相關產品：SNU-484細胞、PTK-1細胞、MADB106細胞
GA-10 clone 4細胞系相關產品：P388.D1細胞、Hs 636 T細胞、SNU-869細胞
Instituto Biologico-Rim Suino-2細胞系相關產品：SSP-25細胞、H6c7細胞、HANK細胞
SNU-719細胞系相關產品：HcerEpic細胞、P36細胞、Sp2/0-Ag14細胞
H2135細胞系相關產品：HCC-1143細胞、Pa14C細胞、OCI-Ly19細胞
KYSE 70細胞系相關產品：REC細胞、Pt-K1細胞、Kit225-K6細胞
GA10細胞系相關產品：H-322細胞、HCT116/L細胞、TK+/- (clone 3.7.2C)細胞
PK-15細胞系相關產品：PIGI細胞、SK Mel28細胞、GB1細胞
Roswell Park Memorial Institute 7951細胞系相關產品：NCI-ADR-RES細胞、SKN-AS細胞、A-375.S2細胞
SupT1細胞系相關產品：HB611細胞、HCC1171細胞、H4-IIE-C3細胞
KYSE-410細胞系相關產品：TE1細胞、SKMEL-1細胞、BTT739細胞
HOP-92細胞系相關產品：L-WRN細胞、SCC25細胞、LA-N-6細胞
COS1細胞系相關產品：Pa14C細胞、H-1373細胞、YT細胞
TF-1細胞系相關產品：Chang liver細胞、Alexander cells細胞、hTERT RPE1細胞
H-865細胞系相關產品：Huh-7.5細胞、A20細胞、SKES-1細胞
MAntle cell VERona-1細胞系相關產品：CORL88細胞、PASMCS細胞、Tu686細胞
Sarcoma OSteogenic-2細胞系相關產品：8305C_1細胞、MZ-CRC-1細胞、MC116細胞
GM02219D細胞系相關產品：RMa-bm細胞、WSU-DLCL2細胞、HFT8810細胞
201T細胞系相關產品：Fetal Bovine Heart Endothelial細胞、KALS-1細胞、MDBK (NBL-1)細胞
SK-MEL-2細胞系相關產品：SNU638細胞、Mouse Bladder Tumor line-2細胞、CCD 841 CoN細胞
H820細胞系相關產品：CHP-100細胞、PC 61細胞、IAR-20細胞
WiDr-TC細胞系相關產品：Los Angeles Prostate Cancer-4細胞、SUM-190PT細胞、WIL2 Secreting細胞
UMUC3細胞系相關產品：JJN3細胞、hTERT-RPE1細胞、Rat Lung-65細胞
PK13細胞系相關產品：MIA PaCa-2細胞、MM1S細胞、BEAS-2B細胞
SHG 44細胞系相關產品：HD-LM-2細胞、Hs840T細胞、RT4-D6P2T細胞
JURKAT E-6.1細胞系相關產品：MEL細胞、NCIH647細胞、Balb/c3T3細胞
U-2932細胞系相關產品：Hs 839.T細胞、P3HR1細胞、NRK52E細胞
L-132細胞系相關產品：CAL851細胞、EVSA/T細胞、OCI/AML5細胞
Hs870T細胞系相關產品：JG細胞、NCI-H748細胞、SK-MEL-1細胞
rRTEC細胞系相關產品：H596細胞、NCI-H1105細胞、MCF7ADR細胞
NKL Thawing人NK細胞淋巴瘤細胞系
HPAEpiC細胞系相關產品：Colon-38細胞、IMR-90細胞、hRPTC細胞
Mhh-Call 2細胞系相關產品：GP2-293細胞、RBVEC細胞、J 774A.1細胞
SCC-9細胞系相關產品：Ls-174-T細胞、TU 686細胞、A2780/CP70細胞
TE-6細胞系相關產品：SK MEL 28細胞、MFC細胞、REC-1細胞
HRA 19細胞系相關產品：Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細胞、NCI-H2444細胞、L02細胞
SMA 560細胞系相關產品：HPAF-II細胞、H2444細胞、I90細胞
RT4細胞系相關產品：U-118-MG細胞、OLN 93細胞、SVOG細胞
G422細胞系相關產品：SKGT2細胞、B16F1細胞、H-2170細胞
N87細胞系相關產品：HDSMC細胞、Th17細胞、L-M(TK-)細胞
Hep 3B細胞系相關產品：Factor Dependent Continuous-Paterson 1細胞、SNGM細胞、HEK 293 c18細胞
KYSE0030細胞系相關產品：hOMF細胞、P31/Fujioka細胞、Human Epithelioma-2細胞
"