"NCI-H28 Thawing人惡性間皮瘤細胞系
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
NCI-H28 Thawing人惡性間皮瘤細胞系
細胞生長：貼壁
培養(yǎng)細胞真的不難，最關鍵幾點：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞；２)動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因；３)有時間的話，需要細胞計數，傳相應數目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，傳代細胞的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗；５)個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細胞不能進去太多人，避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細胞時有哪些經驗教訓可以分享呢?１)嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套；３)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進去)；５)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外，超凈臺是用完就開；６)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：３-１：６傳代，每周換液２-３次
細胞復蘇相關注意事項：１.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結果無異常。５.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時１ml細胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。６.復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇１管細胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
NCI-H28 Thawing人惡性間皮瘤細胞系
細胞生長特性：貼壁生長
細胞的凍存：為避免污染造成的損失，最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培養(yǎng)基；包含１０%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基；５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%甘油的新鮮培養(yǎng)基或５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：５０%細胞條件無血清培養(yǎng)基和５０%包含有７.５%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有７.５%二甲基亞砜和１０%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存：計數將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數生長期。以大約２００～４００g離心５分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以１×１０(７)到５×１０(７)細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存：使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數。以大約２００g離心５分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以５×１０(６)到１×１０(６)細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉移到液氮中貯存。
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
IMR-32細胞系相關產品：BpRcl細胞、SKNF1細胞、Hs729T細胞
CCD 19Lu細胞系相關產品：TE 671細胞、HCC1569細胞、H2198細胞
HEK-293-FT細胞系相關產品：NP-69細胞、32D:cl3細胞、C3H/10T1/2-clone8細胞
Liver-02細胞系相關產品：MC-4細胞、GM00637F細胞、Ca-Ski細胞
C-33-A細胞系相關產品：PVEC細胞、293c18細胞、NCI-H2107細胞
SL-29細胞系相關產品：MB39細胞、LED-WiDr細胞、E0771細胞
H-2073細胞系相關產品：Sf21細胞、KMB17細胞、Huh-7細胞
Y-79細胞系相關產品：MBT2細胞、DITNC1細胞、CX-1細胞
NK10a細胞系相關產品：HuTu 80細胞、UMUC14細胞、SN12PM6細胞
A101D細胞系相關產品：SNU-C2B細胞、NCI-A549細胞、B6Tert-1細胞
H-378細胞系相關產品：SW839細胞、NCI-H87細胞、Alpha Mouse Liver 12細胞
MRC-9細胞系相關產品：NCIH1155細胞、Hep-3B細胞、SNU-C2A細胞
NCIH295R細胞系相關產品：TI-73細胞、NCIH1755細胞、NCI-H2591細胞
RD-2細胞系相關產品：Hs 675.T細胞、MDA453細胞、MES-13細胞
DMS79細胞系相關產品：RBL-1細胞、VP229細胞、751細胞
WM-451Lu細胞系相關產品：MD Anderson-Metastatic Breast-453細胞、Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細胞、H23細胞
TR-146細胞系相關產品：MDA-231細胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-3細胞、CHO細胞
Be Wo細胞系相關產品：MDAMB330細胞、LNCaP C4-2B細胞、IMR-32細胞
CMT.64細胞系相關產品：Mv.1.Lu細胞、NCI-H2135細胞、Mel-RM細胞
NCI H82細胞系相關產品：SP2/0 Ag-14細胞、SNU668細胞、Clone Y-1細胞
C-Li-7細胞系相關產品：SW-780細胞、SJSA1細胞、KU 812F細胞
PAMC82細胞系相關產品：mousepodocyte細胞、RIN14B細胞、Homo sapiens No. 578, tumor cells細胞
W256細胞系相關產品：HUC細胞、SNU-739細胞、SKMES1細胞
MeT5A細胞系相關產品：OCIAML5細胞、H2066細胞、Mouse Forestomach Carcinoma細胞
NCIH23細胞系相關產品：mIMCD-3細胞、SUPM2細胞、U-118-MG細胞
HPDLF細胞系相關產品：HCC2935細胞、MLO-Y4細胞、J774 A.1細胞
NCI-H28 Thawing人惡性間皮瘤細胞系
T98 G細胞系相關產品：Colon38細胞、MMQ細胞、32D.cl3細胞
3T3-A31細胞系相關產品：RBE細胞、Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50細胞、SupB15WT細胞
NCI H929細胞系相關產品：SUM 159細胞、J82COT細胞、CCRF-CEM細胞
QBC-939細胞系相關產品：RC13細胞、TSUpr1細胞、P31/Fujioka細胞
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COLO 394細胞系相關產品：HRPEpiC細胞、NPC-TW-039細胞、MHCC 97-L細胞
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Clone 15 HL-60細胞系相關產品：Hs-578Bst細胞、CW-2細胞、KU-19-19細胞
H1838細胞系相關產品：DCS細胞、P3.NS-1/1.Ag4.1細胞、MDAMB157細胞
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PANC 327細胞系相關產品：HepG2/C3A細胞、PC-3M IE8細胞、2E8細胞
H-676細胞系相關產品：X63-Ag 8.6.5.3細胞、Hs742T細胞、H1238細胞
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GM03570細胞系相關產品：Onda 11細胞、NIHOVCAR3細胞、Mouse Bladder Tumor line-2細胞
MRMT-1細胞系相關產品：HOEC細胞、SNU-638細胞、CORL88細胞
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H-2196細胞系相關產品：HTori 3細胞、PANC3.27細胞、C1R細胞
IPEC-J2細胞系相關產品：NT2細胞、Det. 562細胞、ACC-M細胞
C2BBe 1細胞系相關產品：KYSE-510細胞、Hepa-RG細胞、130T細胞
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LS174細胞系相關產品：HIBEC細胞、33604細胞、H1838細胞
FM88細胞系相關產品：BaF3細胞、NCTC-1469細胞、SKO007細胞
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HUVEC細胞系相關產品：QG-56細胞、HCC0078細胞、CL1-5細胞
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DHBE細胞系相關產品：SW900細胞、Suzhou Human Glioma-44細胞、Hep 3B2_1-7細胞
SBC3細胞系相關產品：L-M[TK-]細胞、RPE1細胞、WERI Rb-1細胞
huH 1細胞系相關產品：Lewis lung carcinoma細胞、D283 Med細胞、343MG細胞
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