"PIG1 Adherent正常人皮膚黑色素細胞系
細胞背景資料：皮膚；黑色素細胞；HPV１６轉(zhuǎn)化；男性
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析：總結(jié)１：復(fù)蘇過程沒有問題，是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度，培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS １５-２０%，看看能否幫助貼壁，當(dāng)然也需要考慮血清問題，還有確信拿來的細胞沒問題?？偨Y(jié)２：首先應(yīng)該懷疑凍存，實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小，因為操作簡單，而且死板。１、你凍存的時候是不是消化的時間過長，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個問題，太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序，不可逆轉(zhuǎn)的死亡。２、你的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質(zhì)量非常重要，否則也會死亡。３、你的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過７%，大于５%，太多也不好。４、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。５、你的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴格，很多人容易忘卻這個事情，因為這個東西流程長。６、如果你細胞污染，你是否能很快看到，我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。７、你的細胞在凍存前是否過密。還有，不贊成孵箱污染這個概念的，所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話，這個細菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌，問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題，這個很重要，不能靠猜，否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題，這個見得太多了，別不當(dāng)會事。
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
PIG1 Adherent正常人皮膚黑色素細胞系
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞的凍存：為避免污染造成的損失，最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培養(yǎng)基；包含１０%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基；５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%甘油的新鮮培養(yǎng)基或５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：５０%細胞條件無血清培養(yǎng)基和５０%包含有７.５%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有７.５%二甲基亞砜和１０%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存：計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。以大約２００～４００g離心５分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以１×１０(７)到５×１０(７)細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存：使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數(shù)。以大約２００g離心５分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以５×１０(６)到１×１０(６)細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
Hs 688(A).T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCC25細胞、E.G7-OVA細胞、SK LU 1細胞
H-1993細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Panc02細胞、Wistar Institute, Susan Hayflick細胞、293A細胞
Hep-3B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs445細胞、T24細胞、HOS/MNNG細胞
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
SK Hep1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：D-324MED細胞、Murine Lung Epithelial-12細胞、CCD841CoTr細胞
P3X63Ag8細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK293A細胞、SCC-7細胞、SNU407細胞
C8D1A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1930細胞、HELA-GFP細胞、Dunn LM8細胞
細胞生長特性：貼壁
PIG1 Adherent正常人皮膚黑色素細胞系
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié)：１)一般客戶拿到細胞后，應(yīng)該注意什么？客戶收到細胞后先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞１００X，２００X各一張)，排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過８０%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下１０ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過８０%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、１０００轉(zhuǎn)/分鐘離心２分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制；２)快遞細胞多久能到，是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞？我們采用快遞發(fā)貨，一般外地２--３天，寄細胞前請確認當(dāng)?shù)販囟?，如果氣溫低于４度的，則采用郵寄凍存細胞；３)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應(yīng)，造成細胞無法存活；４)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
KMS11細胞系相關(guān)產(chǎn)品：B 95-8細胞、HCA-7細胞、RBMEC細胞
PIGI細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GTL 16細胞、HS-683細胞、Y3細胞
LLCMK2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L615細胞、Hs888Lu細胞、Hs_578t細胞
FU-MMT-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KG-1a細胞、H-522細胞、SK-Mel 2細胞
NK-10A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：X63細胞、EFO 27細胞、LL/2(LLc1)細胞
Jurkat (clone E6-1)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW756細胞、CEM-CCRF (CAMR)細胞、MOLT-16細胞
Colon-26細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LN 382細胞、PM6細胞、COLO 357細胞
KYSE-70細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK/293細胞、NCI-H82細胞、Nthy-ori 3.1細胞
MLO-Y4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HELF細胞、Hs 832(C).T細胞、Jiyoye (P-2003)細胞
Strain L-929細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LED-WiDr細胞、H1915細胞、MT-4細胞
RDES-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HuT 78細胞、U-373-MG細胞、C-Lu-65細胞
HT-22細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC 70細胞、Lewis lung carcinoma line 1細胞、Walker 256細胞
FOXNY細胞系相關(guān)產(chǎn)品：B16/F1細胞、P815細胞、251 MG細胞
PIG1 Adherent正常人皮膚黑色素細胞系
L細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PMVEC細胞、DU-4475細胞、NCI-SNU-668細胞
TOV-112D細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ECGI10細胞、HEK293-H細胞、Hs68細胞
ECC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：3T3 Swiss Albino細胞、Neuro2a細胞、H2126細胞
ECC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：3T3 Swiss Albino細胞、Neuro2a細胞、H2126細胞
RSC-96細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKRC-52細胞、769-P細胞、SUM 52PE細胞
NT-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CATH.a細胞、CT 26細胞、3T3-L1細胞
H1436細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hep 2細胞、NRK clone 49F細胞、D6P2T細胞
Human ErythroLeukemia細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EBC-1細胞、LAN6細胞、GM3570細胞
OVCAR-420細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LICR-HN-6細胞、MDA435細胞、SNU-216細胞
ARPE19細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Balb/3T3-4-Cl31細胞、U 937細胞、IM 9細胞
WM2664細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-172 MG細胞、P3J HR1-K細胞、KYSE 50細胞
GS9L細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mouse INsulinoma 6細胞、RAMOS2G64C10細胞、RGE細胞
PIGI細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GTL 16細胞、HS-683細胞、Y3細胞
SK-MEL-31細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHO cell clone K1細胞、Centre Antoine Lacassagne-39細胞、PC 61.5.3細胞
RPMI 1846細胞系相關(guān)產(chǎn)品：AMC-HN8細胞、CMT64細胞、TE85細胞
NCIH2291細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mouse Colon 38細胞、WB F344細胞、KE37細胞
KYSE 520細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H2122細胞、RC-4B/C細胞、NCIH889細胞
HGSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE12細胞、RC92A細胞、NCI H82細胞
RIN14B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CFSC-8B細胞、SCC-15細胞、LC-1-sq細胞
J.E6-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JROECL 33細胞、SU86_86細胞、18G3.cl 1細胞
Hs.27細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-526細胞、Hs 578Bst細胞、Nb 2細胞
CEMO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-1395細胞、MADB 106細胞、NUGC-3細胞
H-2330細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Soleus clone 8細胞、RL-952細胞、HEK293FT細胞
293EBNA細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM-3573細胞、A375-MEL細胞、Hs-281-T細胞
CL 1-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PANC-1細胞、H-1563細胞、IBMF-7細胞
Clone Y-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C-Lu65細胞、H1666_DA細胞、CCLP1細胞
CCK-81細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H6c7細胞、MA-c細胞、Mouse Colon 38細胞
B16F0細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK-293-FT細胞、NCI H2106細胞、MLA144細胞
VE細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GC-2spd(ts)細胞、LM3細胞、EA.Hy926細胞
RH30SJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品：End1/E6E7細胞、TCC-SUP細胞、HT22細胞
EVSA/T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCI/AML-5細胞、NCI-H196細胞、A9細胞
IM-9細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW948細胞、CPA47細胞、NCL-H548細胞
COLO-684細胞系相關(guān)產(chǎn)品：DMS 273細胞、NCI-SNU-668細胞、Hs852細胞
FHs74Int細胞系相關(guān)產(chǎn)品：D341細胞、KP-N-RT-BM細胞、CAL85-1細胞
H4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：M1細胞、RPMI-2650細胞、SNU761細胞
CEM T4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：DHL5細胞、Douglas Foster-1細胞、NPA 87細胞
MC-CAR細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NSH細胞、SKLU1細胞、BE2M17細胞
Hs_578t細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NOZC-1細胞、MILE SVEN 1細胞、NCIH1876細胞
SK-Mel 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 683細胞、KYSE 140細胞、Murine Leydig Tumor Cell line-1細胞
B4G12細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MUM2B細胞、PCI:SG231細胞、Hs-578Bst細胞
R1800[RA]細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EFM-192A細胞、NCI H716細胞、NCI-SNU-398細胞
NCIH345細胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO 738細胞、MT4細胞、Jurkat clone A3細胞
PIG1 Adherent正常人皮膚黑色素細胞系
138 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-9724細胞、A-204細胞、C2BBe1細胞
NCI-128細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SL1細胞、SW 48細胞、NCIH1651細胞
KG-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SPC-A1細胞、Hs 895.T細胞、AMJ2-C8細胞
KALS1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH209細胞、2BS細胞、Cloudman S91 melanoma細胞
NCI-H889細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3 88 D1細胞、MCF.10A細胞、BCAP37細胞
A1847細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H345細胞、NCI-H647細胞、P-2003細胞
HFTF細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HeLa細胞、AX-Mel細胞、NCIH1048細胞
SG231細胞系相關(guān)產(chǎn)品：K7M2細胞、32Dc3細胞、MRMT-1細胞
NCIH747細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK Mel 1細胞、RFL-6細胞、U266BL細胞
PT-K75細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KBM5細胞、VP 267細胞、LS-513細胞
PATU-S細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SHZ-88細胞、MDA-MB-231細胞、Panc_08_13細胞
LLCMK2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L615細胞、KATO 3細胞、P3/NS1/1-Ag4.1細胞
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