"S16 epithelioid cells大鼠施旺細胞系 細胞背景資料:Schwann細胞;自發(fā)永生 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 C32-mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLAG-66細胞、huH 1細胞、WEHI-279細胞 CNE2Z細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LOU-NH-91細胞、COS-1細胞、CNE細胞 BE2C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H.Ep.-2細胞、DLD1細胞、LA4細胞 細胞生長:貼壁 S16 epithelioid cells大鼠施旺細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 冷凍細胞解凍程序:依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒炐枰?,必須有所不同時,務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細胞適應(yīng)后,方進行所需之實驗。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清),對細胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37°C水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。依據(jù)細胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)?。保癿l培養(yǎng)基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25或T75flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對絕大多數(shù)細胞而言,1%以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細胞懸浮液放入5-10ml培養(yǎng)基中,離心300xg(約1000rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 SUDHL-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-119細胞、JIMT-1細胞、COS1細胞 JeKo 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF-2細胞、TE-8細胞、hOMF細胞 HeLa 229細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA-2cl.D1細胞、LS 180細胞、FRTL5細胞 RGCs細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MES-1細胞、C81-61細胞、3T6 Swiss Albino細胞 HCET細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H295R細胞、FM88細胞、EA.hy 926細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 S16 epithelioid cells大鼠施旺細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 JOSK-M細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNO-1細胞、Colo699細胞、HcaF細胞 Leydig細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTSC-3細胞、BPH-1細胞、MC3T3-L1細胞 MDA MB 361細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H3255_DA細胞、Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1細胞、HFF-1細胞 TE13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1944細胞、GM05372細胞、CT26.CL25細胞 MS751細胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS1細胞、EJ 138細胞、HEK-293 c18細胞 253JB-V細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV2008細胞、HSC-6細胞、NCI-HUT-520細胞 WEHI-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BERH-2細胞、PC-12細胞、SKGT4細胞 U138-MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HN-6細胞、ST-2細胞、BIU87細胞 MT-2J細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNAS細胞、FUOV1細胞、293/EBNA細胞 SNUC2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PaTu 8988 S細胞、H-727細胞、C-28/I2細胞 S16 epithelioid cells大鼠施旺細胞系 UCLA RO-81-A-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 EBNA細胞、Molm 13細胞、SUDHL8細胞 M-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEEpiC細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-415細胞、RPMI7951細胞 RCC-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A549細胞、KPL1細胞、COLO 320 HSR細胞 NCIH524細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SDBMSC細胞、MDA-415細胞、Kit225細胞 MDA-175細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tn-5細胞、KY180細胞、M4e細胞 Calu6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ra #1細胞、RPMI8402細胞、HEK-A細胞 Calu6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ra #1細胞、RPMI8402細胞、HEK-A細胞 KALS-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RA 1細胞、SUDHL1細胞、OVCA433細胞 Hs-729-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI8226細胞、OCILY-10細胞、MM96L細胞 HCC1438細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-BE-2細胞、OVCA-433細胞、A-673細胞 NUGC3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMRC-RCZ細胞、SU-DHL6細胞、16-HBEo細胞 SSP-25細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH 3T3細胞、MDCK細胞、MCF10-A細胞 MDA361細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC0038細胞、RCC 786-O細胞、QG56細胞 H-2030細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCIAML4細胞、HCC827細胞、H-128細胞 SK HEP-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-293-H細胞、HTR8細胞、HTori 3細胞 A875細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU182細胞、U2932細胞、H820細胞 HEC1-A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C33A細胞、hA549細胞、LAPC-4細胞 HCE-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-8_13細胞、CBRH-7919細胞、HTh-74細胞 MHCC97-L細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKCO1細胞、SACC83細胞、NCI-H2126細胞 PC3M-1E8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEMx721.174.T2細胞、MC3T3-E1 Subclone 4細胞、Hs839.T細胞 NS1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-889細胞、OVCAR-5細胞、AN3細胞 SCC-15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MKN 28細胞、SK-MEL-1細胞、OB2細胞 MyLa 2059細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 melanoma細胞、KYSE 520細胞、mRTEC細胞 RT-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRFCEM細胞、HPDE6c7細胞、ASH-3細胞 Hs27F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LWnt3A細胞、IPLB-Sf21-AE細胞、HLEpiC細胞 X63-AG 8.653細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAN-5細胞、OVCAR433細胞、H-157細胞 THLE-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TALL-1 [Human adult T-ALL]細胞、EBC-1細胞、NPC-TW039細胞 A-1847細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SL-29細胞、HuTu-80細胞、6-T CEM細胞 OCIAML3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BetaTC6細胞、GM2132細胞、HS-5細胞 SNU368細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB-4細胞、GM02219細胞、Detroit562細胞 PLMVEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB6 clone 30, subclone 7b細胞、HTh-74細胞、L(TK-)細胞 NTERA2-D1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TGBC11TKB細胞、H378細胞、BT-549細胞 UPCI:SCC090細胞系相關(guān)產(chǎn)品:alpha-TC1.6細胞、HP615細胞、EFM-19細胞 Swiss3T3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T6-Swiss albino細胞、NCI-BL6細胞、NCIH661細胞 OCI-Ly3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C8166細胞、WERI-Rb-1細胞、PLA801D細胞 Laboratory of Allergic Diseases 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-DHL-1細胞、Hep 3B2_1-7細胞、GM-215細胞 HCC1954 BL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50細胞、HPC-Y5細胞、SW 900細胞 Ramos 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBE 135-E6/E7細胞、SK-N-BE-2c細胞、Sc-1細胞 Caov-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IR983F細胞、Cor L51細胞、SW13細胞 JB-6 Cl 30細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-343 MG細胞、EC-109細胞、V79細胞 Panc-8_13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUV-EC-C細胞、KMST6細胞、NCIH838細胞 NCI-SNU-398細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC-9細胞、MDA 231-LM2-4175細胞、SNU423細胞 Hs606細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JHH7細胞、HDMEC細胞、Panc 8.13細胞 TE-14細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-20細胞、C33A細胞、HEC1A細胞 NTERA2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-4細胞、NK-92 MI細胞、SW 1353細胞 NCI-H2591細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AML 12細胞、MC38細胞、Tu 212細胞 MDBK (NBL-1)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H378細胞、RIN-m細胞、COR-L23/P細胞 Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-869細胞、SK-Col-1細胞、D341細胞 ARO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:2PK3細胞、MOLM-14細胞、A375.S2細胞 HS940細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_02_03細胞、Anip-973細胞、A-9細胞 CCD-841CoN細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPF細胞、Tsup-1細胞、hTERT-RPE細胞 S16 epithelioid cells大鼠施旺細胞系 HCT-116細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TGW-I-nu細胞、HS 1.Tes細胞、HCET細胞 KLN 205細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-175細胞、NCIH661細胞、HCC-38細胞 S16細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MS751細胞、HOPC細胞、NCI-H322T細胞 MDA MB 361細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H3255_DA細胞、LS411N細胞、WIL2S細胞 "
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