"NCI-H820 epithelioid cells人乳頭狀肺腺癌細胞系 細胞背景資料:乳頭狀肺腺癌;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;男性 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 HCT.116細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SO-Rb 50細胞、P3-X63-Ag8-653細胞、SHSY-5Y細胞 SW-1783細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRhK4細胞、CHOK1細胞、U14細胞 38C13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:YH細胞、P31-FUJ細胞、Tn5 B1-4細胞 細胞生長:貼壁 NCI-H820 epithelioid cells人乳頭狀肺腺癌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細胞因傳代而遲早會出現(xiàn)變異,有時因寄贈、交換和購買,培養(yǎng)細胞從一個實驗室轉(zhuǎn)運到另一個實驗室,的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要。現(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長期保存。細胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細胞的嚴重損傷。凍存細胞的復(fù)蘇:凍存細胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細胞要快速融化,并直接加入完全生長培養(yǎng)基中。若細胞對凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長培養(yǎng)基鋪板細胞。1ml凍存細胞使用10~20ml完全生長培養(yǎng)基。進行活細胞計數(shù),細胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細胞/ml;培養(yǎng)細胞12到24小時,更換新鮮的完全生長培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細胞加入到大約25ml完全生長培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細胞,并且進行活細胞計數(shù)。細胞鋪板,細胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細胞/ml。細胞的分化:一個成年人全身細胞總數(shù)約1012個,可以區(qū)分為200多種不同類型的細胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細胞均來自一個受精卵細胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細胞分化。細胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細胞的產(chǎn)生和分化,這個過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長不斷分裂的細胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細胞周期中G1期開始時一個確定的點G0點“逃逸”出細胞周期。旺盛生長分裂的細胞和各種分化了的細胞,它們的基因表達和代謝活動各不相同。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 IGR-OV1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1734細胞、EMT6細胞、MFD-1細胞 NTERA-2 cl.D1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM02219細胞、HMC3細胞、B16/F1細胞 MT4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B6Tert-1細胞、XWLC-05細胞、MRC-5細胞 PE/CA-PJ-34細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-OV-433細胞、SUM52細胞、S-16細胞 HLEB3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:McA-RH 7777細胞、2780CP細胞、NRK-52E細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 NCI-H820 epithelioid cells人乳頭狀肺腺癌細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 C6661細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLP-8細胞、THLE-3細胞、NS1細胞 HCC1438細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-BE-2細胞、OVCA-433細胞、A-673細胞 Granta-519細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RMS13細胞、RPMI 8226/S細胞、SUM 102PT細胞 J82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y1細胞、SW-480細胞、CAKI 1細胞 RGC5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa.S3細胞、L- cell細胞、SW839細胞 G401細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PaTu-8988s細胞、GM03571細胞、H322細胞 University of Michigan-Renal Carcinoma-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT 1376.T細胞、OVCAR 433細胞、PANC 1005細胞 CHOS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF 7細胞、HBE 135-E6E7細胞、TYKnu細胞 EST50細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-1095Sk細胞、GLRK 13細胞、SKES1細胞 H-810細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKRC-42細胞、COLO-320DM細胞、H 9細胞 NCI-H820 epithelioid cells人乳頭狀肺腺癌細胞系 BC-PAP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NMCG-1細胞、QG56細胞、WM 239A細胞 NCIH64細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colo-201細胞、HL-1細胞、HOP62細胞 H-510A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUT28細胞、Line 207細胞、McCoy細胞 HPDLF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC2935細胞、MLO-Y4細胞、J774 A.1細胞 SMA 560細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF-II細胞、H2444細胞、I90細胞 RH30SJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:End1/E6E7細胞、TCC-SUP細胞、HT22細胞 EB3 [Human Burkitt lymphoma]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Okayama University Medical School-27細胞、H929細胞、SW480E細胞 HCC1395細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-829細胞、3T6細胞、Human Fetal Thymocyte-8810細胞 PG-BE1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1792細胞、SUPT-1細胞、H510A細胞 ECV-304細胞系相關(guān)產(chǎn)品:National Medical Center-Glioma 1細胞、F56 [Human neoplasm]細胞、SDBMSC細胞 ETCC007細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VP303細胞、Panc 08.13細胞、RCS細胞 NCI-UMC-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-115細胞、H1623細胞、NK-92 MI細胞 REC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H-82細胞、MDA-MB 361細胞、SY5Y細胞 NCI-460細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL12T細胞、GFP-Olig2細胞、MKN-7細胞 P388-D1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCL-I細胞、SU8686細胞、CoCL3細胞 hTERT-RPE-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SAS細胞、MASMC細胞、TE32細胞 KMS-18細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MALME.3M細胞、TCam 2細胞、HH [Human lymphoma]細胞 OE21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H508細胞、ECV304細胞、H64細胞 RAOEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS62細胞、WSU-HN13細胞、H-1355細胞 SUSM1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 527細胞、KNS-42細胞、Eca109細胞 NCIH1688細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H23細胞、AGS細胞、786-0WT細胞 CAL33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-1846細胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-1細胞、F-81細胞 MA 104細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IHHA-1細胞、NCIH1876細胞、NCI-H1568細胞 Pa017C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLA802細胞、CWR22Rv1細胞、Li-7細胞 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