"OP9 epithelioid cells小鼠骨髓基質(zhì)細胞系 細胞背景資料:骨髓基質(zhì);C57BL/6 x C3H 細胞形態(tài):上皮細胞樣 貼壁細胞消化傳代時通常采用兩種方法:一、加入胰酶等細胞脫落后,再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,離心傳代;二、加入胰酶后,鏡下觀察待細胞始脫落時,棄胰酶,加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩,而后者有可能對細胞施加胰酶選擇,因為總是貼壁不牢的細胞先脫落,對腫瘤細胞來說,這部分細胞有可能是惡性程度較高的細胞亞群。一種簡單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s),棄之,再加入適量胰酶作用10s-40s(根據(jù)細胞消化的難易程度),棄之,這樣依賴殘余的胰酶就可將細胞消化單細胞。對于較難消化的細胞,可以用2%利多卡因消化5-8分鐘,然后再棄去,加培養(yǎng)基吹打也可以,對細胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗,只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點,直接加酶消化應該不會有什么問題。棄培養(yǎng)液后,用0.04%的EDTA沖洗一次,再用1/4v的0.04%的EDTA室溫孵育5min,棄取大部分EDTA,加入與剩余EDTA等量的胰酶(預熱)總體積1/10v。消化到有細胞脫落。不過有人說EDTA對細胞不好,有證據(jù)嗎?培養(yǎng)的BASMC:倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下,倒掉再加入0.125-0.25%胰酶約6-10滴或1ml(25ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和,并分瓶這種方法簡單、省事;效果很好并且不損失細胞! LC2/Ad細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCM1細胞、McG-1細胞、Hep II細胞 P3HR1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU119細胞、KYSE 450細胞、Clone 166細胞 MNNG-HOS (Cl#5)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P31-FUJ細胞、HCGC細胞、Hi-5細胞 細胞生長:貼壁 OP9 epithelioid cells小鼠骨髓基質(zhì)細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點應不會影響細胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應立即停用,更換另一批號的血清。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 BNL.CL2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TFK-1細胞、MA-104細胞、NCIH244細胞 Hs 706.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC4細胞、HCC1438細胞、HCC-1599細胞 MKN-45細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHSY-5Y細胞、HPB/ALL細胞、MCF-7細胞 SW-1573細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDBK (NBL-1)細胞、IM 9細胞、NR 8383細胞 BHP-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-Mel 2細胞、FCCH1018細胞、OE33細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 OP9 epithelioid cells小鼠骨髓基質(zhì)細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作):1)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在1-2min);2)鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散;3)取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);4)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存;特別注意:(如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))1)收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時);2)貼壁細胞收到當天切忌立刻消化,請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng);3)如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室。 PCI:SG231細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCTC-1469細胞、NCI747細胞、A10細胞 MGSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM 115細胞、Hs675細胞、16HBE14o-細胞 PNT1/A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1599細胞、Hs729T細胞、NRK-49F細胞 HCC-2279細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAEC細胞、UMRC2細胞、UO31細胞 IHC-ST1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Be-Wo細胞、H-3255細胞、HPC-Y5細胞 MSTO-211細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC2細胞、TFK1細胞、SK.MEL.2細胞 ZR751細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK (15)細胞、DI TNC1細胞、CHP-212細胞 COLO 205細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H4-II-E細胞、SUM 102PT細胞、COLO_320DM細胞 Tb1.Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CPA47細胞、H-1869細胞、L363細胞 SK Col 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KOSC-2細胞、NCIH2228細胞、NCI H929細胞 OP9 epithelioid cells小鼠骨髓基質(zhì)細胞系 NCIH292細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS 683T細胞、Beta-TC-6細胞、BRL細胞 BT483細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SN-12C細胞、RPMI8226/S細胞、NCI-H1648細胞 SK-NEP-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCL II細胞、Dunn LM8細胞、COLO-829細胞 University of Arizona Cell Culture-812細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI 231細胞、HCC-1143細胞、NCIH460細胞 A-375SM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCa/16A3-F細胞、NCIH1355細胞、NR8383細胞 Sup T-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA-2 cl.D1細胞、MC116細胞、SK-MEL-MeWo細胞 Sup T-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA-2 cl.D1細胞、MC116細胞、SK-MEL-MeWo細胞 HT144-mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA MB 436細胞、C6細胞、IHH細胞 U937細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kasumi-6細胞、Rat Lung-65細胞、SF 126細胞 SK-Mel1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-3M-2B4細胞、OVCAR-433細胞、Ketr3細胞 KTCTL-140細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C518細胞、COLO 684細胞、H-1954細胞 MBMEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CNLMG-B5537SKIN細胞、alphaTC1 Clone 6細胞、UPCI:SCC90細胞 TJ905細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCC-HEL-1細胞、SNU-407細胞、Pa017C細胞 SK.MEL.28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1770細胞、U-251細胞、Z138細胞 MHCC97L細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSADX5細胞、COLO 741細胞、CEM-C7細胞 MH-S細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細胞、PC12(高分化)細胞、KE39細胞 THP-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR420細胞、P388-D1細胞、High Five細胞 CHL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MBMEC細胞、NCI-H220細胞、MDA157細胞 SkChA1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:REC1細胞、H-146細胞、LU165細胞 CMT.64細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mv.1.Lu細胞、NCI-H2135細胞、Mel-RM細胞 Large Cell Lung Cancer-103H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WPMY-1細胞、A2780CP細胞、NCI-SNU-423細胞 PANC 1005細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEP2D細胞、Psi-2-DAP細胞、JVM-3細胞 COLO-320-HSR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA 433細胞、TERT-RPE1細胞、RPTEC/TERT1細胞 H-661細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PCI-4M細胞、MKN7細胞、HCC1359細胞 8226/S細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LCD細胞、HCC-4006細胞、293細胞 C3H10T1-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:V79-1細胞、BT 325細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-5細胞 NP69細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2023細胞、LM(TK-)細胞、NCI-H1573細胞 Ca9-22細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C643細胞、MV-4-11細胞、NCIH128細胞 CD18/HPAF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB-9細胞、RL95-2細胞、Chinese Hamster Lung細胞 CEM-C7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL120細胞、NOMO-1細胞、Farage OL細胞 JS1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:786-O RCC細胞、GM07404A細胞、CHP-126細胞 P3/X63/Ag8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1666細胞、HFSF細胞、CAL-62細胞 Mv 1 Lu (NBL-7)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCaP 37細胞、H-1944細胞、NCI-UMC-11細胞 TE15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:N-Tera-2細胞、PAEC細胞、4T1-LUC細胞 WSUDLCL2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCC-HPF-1細胞、TE 32細胞、LAN5細胞 MEC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J 111細胞、Rat Chondrosarcoma Swarm細胞、SK Col 1細胞 TE1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2228細胞、COLO-320HSR細胞、Med 341細胞 HUT 28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1666細胞、SNU-475細胞、MEG-01細胞 LK 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MZ-CRC-1細胞、LADMAC細胞、J774 A1細胞 Hs578Bst細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC10 RGB細胞、A427細胞、EFM192C細胞 Ku812F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:159PT細胞、GC-2細胞、CD-18細胞 Ramos 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBE 135-E6/E7細胞、SK-N-BE-2c細胞、Sc-1細胞 JM-Jurkat細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PFSK-1細胞、TE85細胞、Hs274T細胞 LNCaP-Clone-FGC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1954細胞、3T6 Swiss Albino細胞、Tj-905細胞 PIEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-SH-SY5Y細胞、GC-1 spg細胞、WiDr-TC細胞 H28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1618細胞、HOK細胞、V79-GalK1細胞 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