Ki67細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

中文名稱：Ki67細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

英文名稱：Ki67 cell proliferation Detection Kit

產品規(guī)格：20T

Ki67 蛋白是細胞周期相關的一種核蛋白，主要表達于細胞增殖分裂的各個時期（G1、S、G2 和M 期），但是在靜息的細胞（G0 期）中不表達。Ki67 常用于檢測腫瘤細胞的生長指數（免疫組化法利用計算細胞總數中的Ki67 陽性細胞數所占比例得到Ki67 指數）。

Ki67 通常通過標記抗Ki67 的抗體（FITC 綠色熒光）和DNA 染料碘化丙啶（PI，紅色）而利用流式細胞儀檢測來實現對細胞周期的檢測。

操作方法
1. 在最適的環(huán)境下培養(yǎng)細胞。
2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶處理和收集細胞，離心，（注意1）保證每管細胞數在106 個。
4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀細胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細胞2 次。
7. 用100μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重懸細胞，加入1ul Ki67 抗體(1μg/106 cells)，室溫孵育1 小時。
8. 離心收集細胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 離心收集細胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細胞。
11. 避光使細胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，轉移至流式檢測管中重懸。
12. FACS 檢測或者儲存于4℃。
 

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