Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

中文名稱：Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20次|50次

本試劑盒是用FITC標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒?？梢允褂昧魇郊?xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。一個(gè)包裝的本試劑盒共可以檢測(cè)20個(gè)細(xì)胞樣品。

試劑盒組份：
Annexin V-FITC——————100µl
Annexin V-FITC結(jié)合液———12ml
碘化丙啶染色液——————220µl

Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報(bào)道可以調(diào)控一些PKC的活性。

Annexin V選擇性結(jié)合磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡(jiǎn)稱PS)。磷脂酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會(huì)把磷脂酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷脂酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會(huì)促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。

用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡(jiǎn)單而直接地檢測(cè)到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。

本試劑盒還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對(duì)于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。

本試劑盒的流式檢測(cè)效果參考圖1和圖2，熒光顯微鏡檢測(cè)效果參考圖3。


圖1.細(xì)胞用本試劑盒染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的效果圖。Jurkat細(xì)胞未經(jīng)處理(A)或用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時(shí)(B)后，用本試劑盒染色，然后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞的散射和熒光檢測(cè)。從圖中可以看出，經(jīng)過凋亡誘導(dǎo)劑喜樹堿處理后的細(xì)胞，其Annexin V-FITC染色陽性并且PI染色陰性的細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞，明顯增加(B圖的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色雙陽性的細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，也有所增加(B圖的右上象限)。圖中Annexin V-FITC染色陰性PI染色陽性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B圖的左上象限)出現(xiàn)的細(xì)胞點(diǎn)是許可范圍內(nèi)的檢測(cè)誤差。實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)可能會(huì)因細(xì)胞類型、細(xì)胞凋亡情況、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。


圖2.細(xì)胞用本試劑盒染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)效果驗(yàn)證圖。Jurkat細(xì)胞用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時(shí)后，未經(jīng)染色(A)、僅用本試劑盒中的PI進(jìn)行染色(B)、僅用本試劑盒中的Annexin V-FITC進(jìn)行染色(C)、用本試劑盒中的Annexin V-FITC和PI進(jìn)行雙染(D)。從圖中可以看出，未經(jīng)染色的是雙陰性細(xì)胞(A)，僅PI染色后出現(xiàn)了預(yù)期的PI染色陽性的細(xì)胞，僅Annexin V-FITC染色出現(xiàn)了預(yù)期的Annexin V-FITC染色陽性的細(xì)胞，Annexin V-FITC和PI雙染出現(xiàn)了預(yù)期的僅Annexin V-FITC染色陽性的凋亡細(xì)胞和雙陽性的壞死細(xì)胞。出現(xiàn)的非預(yù)期的細(xì)胞點(diǎn)完全在許可的誤差范圍內(nèi)。實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)可能會(huì)因細(xì)胞類型、細(xì)胞凋亡情況、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

注意事項(xiàng)：
1. 如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
2. 染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
3. 如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
4. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
5. 用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。

儲(chǔ)存條件：4℃避光，有效期6個(gè)月。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！