"LN-382 Cell:人腦膠質(zhì)瘤細胞系
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞背景資料：膠質(zhì)瘤；男性
Pfeiffer細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-Wnt-3A細胞、OCILY7細胞、MFHL-2細胞
H-1930細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PaCa2細胞、HS-294-T細胞、253J-BV細胞
Human Hepatocyte Line 5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO206F細胞、NB.4細胞、Huh7.5細胞
LTEP a2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3X63 AG 8.653細胞、870細胞、Malme-3 M細胞
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
LN-382 Cell:人腦膠質(zhì)瘤細胞系
細胞傳代時消化的問題：可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗。很多同學(xué)都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細胞為例）；具體操作：１)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗１-２遍，（這是前奏，即為步，目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。２)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了。）３)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入０.３ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打２-３遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用２ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比。）這是第三步。４)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況你自己把握）。這是第四步。其實還可以有第五步，對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能限度地將胰酶對細胞的損傷降到最低，保證細胞的狀態(tài)能夠。當然了，如果細胞是屬于那種很容易消化的細胞，像RAW２６４.７，僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養(yǎng)起來做比較，去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。將細胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外，還有一個更重要的作用就是，可以程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài)，不成片不連體。
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)：１)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加２-３ml ０.２５%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間，通?？刂圃冢?２min)；２)鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散；３)取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；４)注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液(每周２-３次)，待細胞密度達到８０%以后重復(fù)１項操作或者凍存；特別注意：(如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng))１)收到細胞后請盡快更換為含１５%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加１０%的血清，(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過７２小時)；２)貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑６cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)；３)如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系實驗室。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
U-87MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：D341Med細胞、B16/BL6細胞、TT細胞
HepaRG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Sp2/O細胞、HRVEC細胞、HEMCSS細胞
UMNSAH/DF-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCM-460細胞、NCIH1666細胞、H-1993細胞
Centre Antoine Lacassagne-51細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LWnt-3A細胞、HT 1197.T細胞、SRA01/04細胞
SUDHL-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MX-1細胞、NCI-H929細胞、SKml2細胞
細胞生長特性：貼壁
LN-382 Cell:人腦膠質(zhì)瘤細胞系
貼壁細胞消化傳代時通常采用兩種方法：一、加入胰酶等細胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；二、加入胰酶后，鏡下觀察待細胞始脫落時，棄胰酶，加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對細胞施加胰酶選擇，因為總是貼壁不牢的細胞先脫落，對腫瘤細胞來說，這部分細胞有可能是惡性程度較高的細胞亞群。一種簡單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(３０s)，棄之，再加入適量胰酶作用１０s-４０s(根據(jù)細胞消化的難易程度)，棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將細胞消化單細胞。對于較難消化的細胞，可以用２%利多卡因消化５-８分鐘，然后再棄去，加培養(yǎng)基吹打也可以，對細胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點，直接加酶消化應(yīng)該不會有什么問題。棄培養(yǎng)液后，用０.０４%的EDTA沖洗一次，再用１/４v的０.０４%的EDTA室溫孵育５min，棄取大部分EDTA，加入與剩余EDTA等量的胰酶(預(yù)熱)總體積１/１０v。消化到有細胞脫落。不過有人說EDTA對細胞不好，有證據(jù)嗎？培養(yǎng)的BASMC：倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下，倒掉再加入０.１２５-０.２５%胰酶約６-１０滴或１ml(２５ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和，并分瓶這種方法簡單、省事；效果很好并且不損失細胞！
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
Hs-578Bst細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MN 60細胞、P3-Jiyoye細胞、UMR-106細胞
Jurkat-FHCRC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNK-1細胞、SKLMS1細胞、H-508細胞
H220細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-676細胞、L cells細胞、EL 4細胞
HL-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HK-2 [Human kidney]細胞、H1792細胞、OCI-Ly7細胞
NPA87-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUM 52PE細胞、Y3細胞、HT 1376細胞
OCI-Ly 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE8細胞、RGCs細胞、A549 ATCC細胞
HC11 Mammary Epithelium細胞系相關(guān)產(chǎn)品：F98細胞、H-1734細胞、4T1.2細胞
LN-382 Cell:人腦膠質(zhì)瘤細胞系
BV-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKG IIIa細胞、INS1-E細胞、Mo7e細胞
LS 123細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LS1034細胞、GRSL細胞、YTMLC-90細胞
OCI-Ly 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE8細胞、RGCs細胞、A549 ATCC細胞
Hs870T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JG細胞、NCI-H748細胞、SK-MEL-1細胞
LP-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE520細胞、Colon26細胞、HIBEC細胞
Hs 729T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA175細胞、3T3-F442A細胞、SW1463細胞
JF305細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HT115細胞、HT22細胞、HTh74細胞
A375mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKLMS-1細胞、SGC-7901細胞、JHH2細胞
TM-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LS174細胞、3T3-A31細胞、746T細胞
HOC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2073細胞、293S細胞、H1648細胞
MBdSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH810細胞、MC3T3-E細胞、HCT.116細胞
C22細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCAR 420細胞、Ca759細胞、NCIH1417細胞
LS-123細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 739.T細胞、HEK293-F細胞、H2330細胞
NFHIOSE-80細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1細胞、RBL2H3細胞、COLO394細胞
Capan1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-RC-20細胞、UWB1-289細胞、HRMC細胞
H-2452細胞系相關(guān)產(chǎn)品：S-16細胞、hOMF細胞、BCaP 37細胞
RDES細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RC-4B/C細胞、CD 18細胞、BT 549細胞
AML12細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC-3T3-E1細胞、PIG3細胞、Panc-08.13細胞
THP-1(ATCC)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：J.E6-1細胞、BLO-11細胞、Vero 76細胞
MB157細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-1細胞、18G3.cl 1細胞、SK-ChA-1細胞
RPMI 7951細胞系相關(guān)產(chǎn)品：X63.Ag8.653細胞、BEAS 2B細胞、SU-DHL-4細胞
Calu6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Ra #1細胞、RPMI8402細胞、HEK-A細胞
KYSE-270細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCA 38細胞、NCI-H2108細胞、GM02132C細胞
AE1201細胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO 357細胞、WM-266-mel細胞、MM1S細胞
DR2R1610細胞系相關(guān)產(chǎn)品：253J細胞、50.B1細胞、Tregs細胞
L-M(TK-)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GB-1細胞、BALB/3T3細胞、KMM1細胞
FHL 124細胞系相關(guān)產(chǎn)品：38C13細胞、L-M[TK-]細胞、FRO 81-2細胞
SGC996細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEI-193細胞、HDF-a細胞、SNU-407細胞
H1869細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PA12細胞、SW900細胞、H283細胞
COLO357細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H810細胞、WM-239-A細胞、Anip-973細胞
SKRC 39細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JM1細胞、HOCF細胞、NCI H69細胞
COLO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs 766T細胞、OACP4 C細胞、Hs-675-T細胞
SK-MEL-28細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HSF細胞、AQ-Mel細胞、4-1st細胞
H660細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE5細胞、MC3T3-E1(C4)細胞、UPCI-SCC-90細胞
NCTC929細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OAW-42細胞、GM07404細胞、SK-N-BE(1)n細胞
MiaPaca.2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MGHU1細胞、L-428細胞、MDA-MB-330細胞
MV4-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EBTr (NBL-4)細胞、AC16 [Human hybrid]細胞、SKLU01細胞
H9c2 (2-1)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HT clone H9細胞、SKRC-52細胞、LIPF155C細胞
Panc 08.13細胞系相關(guān)產(chǎn)品：AZ 521細胞、HKF細胞、HSAS1細胞
HT144mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDAMB435細胞、HPAF細胞、CHL1細胞
F56 [Human neoplasm]細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CL-11細胞、PANC-02-03細胞、TE-85 clone 5細胞
NCI-H1819細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH2110細胞、KYSE 510細胞、CNE1細胞
TYK-nu細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SEG-1細胞、Mv 1 Lu (NBL-7)細胞、HTSMC細胞
LN-382 Cell:人腦膠質(zhì)瘤細胞系
MCF 7B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：J-111細胞、CCD 1112SK細胞、Hep 2細胞
MSB-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WEHI3細胞、MC57細胞、NBL-5細胞
RL細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCC90細胞、NCIH596細胞、C22細胞
K1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：McCoy B細胞、PLA-802細胞、PNEC30細胞
U373 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：D-341細胞、NUGC-4細胞、H-1395細胞
Hs695T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Rat Basophilic Leukemia-1細胞、COLO320/DM細胞、SUPM2細胞
NUGC3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：VMRC-RCZ細胞、SU-DHL6細胞、16-HBEo細胞
PC 61細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCF-STTG1細胞、Huh-7細胞、H-524細胞
CAOV4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：G-292, clone A141B1細胞、Hs 766細胞、Panc08.13細胞
WEHI 231細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Tn 5B1-4細胞、H1793細胞、H647細胞
RCC4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KM933細胞、NCI-SNU-423細胞、HEK 293-F細胞
MESSA-DX5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GLC-15細胞、PC-3M細胞、Mono Mac 1細胞
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