"IAR 20 Cell:大鼠肝細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:肝; BDVI RAW264.7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK MEL 5細胞、U-266細胞、Panc02-H0細胞 A 2780 CP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-620細胞、SKNBE-1細胞、NCI-H1838細胞 BIU-87/Adr細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA 432細胞、PF-382細胞、KYSE50細胞 SKMEL2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tca-83細胞、SW1353細胞、GM04679細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 IAR 20 Cell:大鼠肝細胞系 細胞傳代時消化的問題:可以這樣說,對于需要消化傳代的細胞,每一次的消化都是對這個細胞存活與否,狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題,自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞,狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題,可以非??隙ǖ卣f,你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以,越長越差。在消化的過程中,你加入胰酶后,所有細胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個問題就是,細胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的,他們受到了差別待遇當然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。(以難消化細胞為例);具體操作:1)首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍,(這是前奏,即為步,目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了。)3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(你也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對比。)這是第三步。4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶,如果你們那比較富裕的話,呵呵。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細胞間隙明顯,細胞獨立開來的時候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(根據(jù)實際情況你自己把握)。這是第四步。其實還可以有第五步,對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話,你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,沒辦法,你必須分多批多次消化,這樣才能限度地將胰酶對細胞的損傷降到最低,保證細胞的狀態(tài)能夠。當然了,如果細胞是屬于那種很容易消化的細胞,像RAW264.7,僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養(yǎng)起來做比較,去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。將細胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外,還有一個更重要的作用就是,可以程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài),不成片不連體。 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 造成實驗室細胞污染常見情況總結(jié):細胞培養(yǎng)中最常見污染的是細菌、真菌和支原體污染。細胞一旦污染,大多數(shù)較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會造成細胞污染呢?我們根據(jù)常見細胞培養(yǎng)實驗分析總結(jié)下?!具`規(guī)操作】1)為節(jié)省時間,有人已經(jīng)用超凈臺四個多小時,不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗;2)器材或者溶液很久沒用,未檢測是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;3)超凈臺不點酒精燈;點了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗;4)不帶手套,徒手操作;5)細胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術(shù)器械、離心機、冰箱等專用儀器設(shè)備以及專用的實驗服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細胞使用。培養(yǎng)細胞過程中使用的所有實驗用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺和桌面,東西太多太亂:超凈臺不是儲物箱,什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺!這樣就會有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。傳代細胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細胞!一不小心“飄”進你的細胞培養(yǎng)板里,細胞就會養(yǎng)的不好,啥時候死了都不知道!【培養(yǎng)箱太久沒清潔】細胞污染了,并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,首先你還得看看這個恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細胞是否污染,如果有而且好幾個板子都有類似的污染塊,那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,得給培養(yǎng)箱做個大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個月的就用酒精擦擦托盤。【傳代細胞人多口雜,難管理】在傳代細胞這種衛(wèi)生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗在無菌條件下操作。出入試驗室,實驗服當風衣穿,不扣紐扣,不戴,就容易造成細胞污染;超凈臺做實驗時,喜歡說話聊著做試驗,要是還不帶口罩,里面就有很多細菌等著去攻擊你的細胞呢! 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 CTLA4 Ig-24細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-1-sq細胞、LC-2/ad細胞、253JB-V細胞 GA10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-322細胞、HCT116/L細胞、TK+/- (clone 3.7.2C)細胞 NCIH187細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J774.A1細胞、CMT.64細胞、HMEC1細胞 Sf-21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KAT5細胞、MiaPaca.2細胞、PC10細胞 Bat lung細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-sm細胞、SHI1細胞、H-187細胞 細胞生長特性:貼壁 IAR 20 Cell:大鼠肝細胞系 貼壁細胞的消化方法介紹:1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時,從組織消化下細胞。這種方法作用溫和,對細胞損傷較小,但是,價格也較貴。中止同樣是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細胞與間質(zhì),對細胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細胞要洗一遍。4、商品化的無酶消化液。個人的使用經(jīng)常覺得對細胞的損傷比較大,但是分離成單細胞懸液的能力確實比較強。5、物理法。直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來。6、冷凍法。此方法僅能用于細胞傳代時。無法使組織上的細胞脫落下來。本方法的原理,我想是因細胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點是:對細胞損傷小,不需要中止或洗細胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細胞。不足是細胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導(dǎo)致大量細胞死亡操作的間充質(zhì)干細胞、DC細胞的培養(yǎng),效果非常滿意。具體過程是:1、用較多的4度的PBS 洗滌一遍細胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,靜置操作臺上,很快細胞就小片脫落,3、輕輕吹打,細胞即完全脫落,4、按一定比例傳代。 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 NEC8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EB3 [Human Burkitt lymphoma]細胞、Rca-B細胞、KYSE410細胞 NCI-157細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP-N-RT細胞、NCIH378細胞、HCC0038細胞 Sp2/0細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1623細胞、LS180細胞、NCIH187細胞 JG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC9細胞、High5細胞、MFE-296細胞 EB3 [Human Burkitt lymphoma]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Okayama University Medical School-27細胞、H929細胞、SW480E細胞 SNU-251細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NSC-34細胞、751-NA-15細胞、CPA 47細胞 MBdSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH810細胞、MC3T3-E細胞、HCT.116細胞 IAR 20 Cell:大鼠肝細胞系 MB49細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOC細胞、SF-763細胞、Mhh-Call 2細胞 HBL 100細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RKOE6細胞、HCT 8細胞、ZR751細胞 RPMI7951細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-BE(2)-C細胞、HT144細胞、TGW-nu細胞 KMY1022細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCILY-19細胞、CT26.CL25細胞、HCC0095細胞 BC-025細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos G6.C10細胞、Human Microglia Clone 3細胞、NCI-H748細胞 RWPE-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C 643細胞、SF-539細胞、NT2D1細胞 H-727細胞系相關(guān)產(chǎn)品:293A細胞、U251細胞、PK-13細胞 AML-EOL-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSAS1細胞、FAK+/+細胞、NCI-H2009細胞 SW 1463細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC202細胞、H-345細胞、GT38細胞 SW 1463細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC202細胞、H-345細胞、GT38細胞 GM07404細胞系相關(guān)產(chǎn)品:639-V細胞、Pa017C細胞、OCI/AML-5細胞 SRA01/04細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-149PT細胞、MAEC細胞、Colo-201細胞 CEM-0細胞系相關(guān)產(chǎn)品:33604細胞、NCIH1341細胞、NB1-RGB細胞 ATN1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NOR 10細胞、GM-215細胞、H-727細胞 HUT-226細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC23細胞、COLO-699細胞、OVCAR10細胞 SU-DHL2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCoEpiC細胞、Oka-C1細胞、TMD8細胞 SCL-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-266-4細胞、UCLA-SO-M20細胞、NCI-H647細胞 WM35細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-172細胞、293F細胞、H-2286細胞 HBE 135-E6E7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SaOS細胞、HPAEpiC細胞、Clone 929細胞 COLO 320細胞系相關(guān)產(chǎn)品:THLE-2細胞、UM-UC-3細胞、NCI-H1876細胞 MUTZ1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-X63Ag8細胞、Human Epithelioma-2細胞、HITT15細胞 MUTZ1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-X63Ag8細胞、Human Epithelioma-2細胞、HITT15細胞 451-LU細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-138 MG細胞、LY-R細胞、HOP92細胞 EJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hepa-RG細胞、SNT8細胞、CORL105細胞 Hs729細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 08.13細胞、HONE1細胞、MC3T3-E細胞 IOSE-Van細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VM Cub 1細胞、Potorous tridactylus Kidney 1細胞、HMO6細胞 NCI-H292細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FC33細胞、GM04671細胞、Eca-109細胞 NTera 2/cl.D1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1155細胞、OVCAR432細胞、ssMCF-7細胞 SKLU1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BTI-Tn-5B1-4細胞、H2085細胞、CNE2細胞 RPE-hTERT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:alpha TC1.6細胞、NTERA2細胞、D-283MED細胞 SK-MEL2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO824細胞、NCIH2286細胞、NBL-2細胞 CAL148細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs895T細胞、QG-56細胞、SKOV-433細胞 HFF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAEC細胞、HuH 6細胞、P3.653細胞 8305C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MKN28細胞、NCI-H719細胞、SK-MEL2細胞 A 2780 CP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-620細胞、SKNBE-1細胞、NCI-H1838細胞 HT29細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 962細胞、OVCA-432細胞、HCT_116細胞 SNU520細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2170細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-6細胞、MPASMC細胞 L-6 myoblast細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P30-OHKUBO細胞、SKCO-1細胞、TALL-104細胞 RT-BM 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B95.8細胞、SK MEL-28細胞、CemT4細胞 SNU-368細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AML12細胞、MS 751細胞、5-8F細胞 SNU-368細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AML12細胞、MS 751細胞、5-8F細胞 10T1/2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BGC-823細胞、MT2細胞、NTERA2細胞 CW2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Epstein-Barr-2細胞、MJ細胞、HS 683T細胞 IAR 20 Cell:大鼠肝細胞系 Earle's L cells細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGECs細胞、NCI-SNU-620細胞、JHH7細胞 KP-N-NS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CV 1細胞、NTERA-2cl.D1細胞、OVCAR420細胞 HCe-8693細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLM-16細胞、UACC893細胞、OCIAML5細胞 Sarcoma OSteogenic-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:8305C_1細胞、MZ-CRC-1細胞、MC116細胞 Dysplastic Oral Keratinocyte細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ACC2細胞、SK-RC-42細胞、SKMEL1細胞 Sc-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RS 4;11細胞、SCI1細胞、D283MED細胞 BC3 H1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-27細胞、Los Angeles Prostate Cancer-4細胞、LAC細胞 MFM-223細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKLU-1細胞、KM12-SM細胞、P3X63Ag8-6-5-3細胞 NCI H23細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-747細胞、C4-2B細胞、SCCVII細胞 HEK 293T/17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKML-28細胞、FHs 74 Int細胞、BHT-101細胞 C2-C12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AQ-Mel細胞、WEHI3細胞、KYSE-450細胞 H2107細胞系相關(guān)產(chǎn)品:38C-13細胞、HCO細胞、NCIH2405細胞 "
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