"HMEL Cell:永生上皮細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 細(xì)胞背景資料:上皮細(xì)胞;永生化 GTL16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1184細(xì)胞、H-1341細(xì)胞、MBVP細(xì)胞 CZ-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ST細(xì)胞、EFO-27細(xì)胞、HMC細(xì)胞 MDAMB157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRC-V細(xì)胞、H-596細(xì)胞、no-11細(xì)胞 HCS-2/8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 c18細(xì)胞、PVEC細(xì)胞、GM03570細(xì)胞 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 HMEL Cell:永生上皮細(xì)胞系 如何把細(xì)胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細(xì)胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個(gè)不僅僅是說(shuō)培養(yǎng)基的不同,還有就是細(xì)胞生長(zhǎng)的空間密度問(wèn)題。有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點(diǎn)比較好生長(zhǎng),生長(zhǎng)狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞。譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長(zhǎng)的比較好,譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞,生長(zhǎng)速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞,這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長(zhǎng),而堆與堆之間是有空間的。如果長(zhǎng)成相連在一起的一滿片的時(shí)候,細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了,老化的會(huì)比較多,對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度問(wèn)題。2.對(duì)于有些人總是會(huì)遇到養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)怎么都不好的問(wèn)題。這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。對(duì)于貼壁細(xì)胞,如果細(xì)胞形態(tài)不好,(或者細(xì)胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無(wú)血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進(jìn)行預(yù)吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過(guò)一遍,然后吸走。這時(shí)侯再開(kāi)始正式的消化、吹打。(巨噬細(xì)胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來(lái)的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn),已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺(tái),底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。我稱(chēng)之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞完美形態(tài)。其中要注意,結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)情況。喜歡多一點(diǎn)數(shù)量長(zhǎng)得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。反之亦然。3.關(guān)于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入培養(yǎng)基的量的問(wèn)題。這個(gè)是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細(xì)胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細(xì)胞反而是培養(yǎng)基少一點(diǎn)相反細(xì)胞形態(tài)會(huì)長(zhǎng)得比較好。(可能也是競(jìng)爭(zhēng)很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對(duì)于生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞,易生長(zhǎng)的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基細(xì)胞形態(tài)會(huì)更好。但是要注意換液掌握。4.關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問(wèn)題。個(gè)人發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞在玻璃瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)的狀態(tài)會(huì)比一次性相對(duì)好一些。而對(duì)于同一種細(xì)胞,在其生長(zhǎng)旺盛快速的時(shí)期在玻璃瓶?jī)?nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)也比內(nèi)好。這可能是因?yàn)楸炔A扛菀踪N壁。生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞在這種相對(duì)“更安逸”的環(huán)境里反而長(zhǎng)得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對(duì)于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài),比玻璃瓶會(huì)好,對(duì)于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞,玻璃瓶則會(huì)更好。同樣,對(duì)于同一種細(xì)胞,在其生長(zhǎng)速度慢的時(shí)候,會(huì)好一點(diǎn),比如剛剛復(fù)蘇的時(shí)候,或者原代培養(yǎng)的時(shí)候。而在其生長(zhǎng)旺盛的時(shí)候,玻璃瓶則相對(duì)會(huì)好一點(diǎn)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,原因比較復(fù)雜,常見(jiàn)原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過(guò)程錯(cuò)誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸渾細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤;細(xì)胞置于-80℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái),其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?欲回收動(dòng)物細(xì)胞,其離心速率一般為300×g(約1O(jiān)OOrpm),5-10分鐘,轉(zhuǎn)速過(guò)高或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)都將造成細(xì)胞死亡。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對(duì)離心力決定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中r為離心機(jī)轉(zhuǎn)軸中心與離心套管底部?jī)?nèi)壁的距離;rpm為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù);RCF(relative centrifugal force)為相對(duì)離心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數(shù)來(lái)表示單位。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 NCI-H1563細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO-8910PM細(xì)胞、U87MG細(xì)胞、FHCRC-11細(xì)胞 NCI-H2198細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ca761細(xì)胞、OVCAR5細(xì)胞、DSL6A/C1細(xì)胞 NK92MI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 450細(xì)胞、Biologics Standards-Cercopithecus-1細(xì)胞、Lu99A細(xì)胞 Hs578Bst細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC10 RGB細(xì)胞、A427細(xì)胞、EFM192C細(xì)胞 8505C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BGC823細(xì)胞、NCI-H1930細(xì)胞、Danio rerio Gill細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 HMEL Cell:永生上皮細(xì)胞系 細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測(cè)試工作帶來(lái)了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長(zhǎng)期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長(zhǎng)與形態(tài)等會(huì)有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時(shí)還會(huì)由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實(shí)際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。目前,細(xì)胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接冷凍,細(xì)胞內(nèi)外的水分會(huì)很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。如細(xì)胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高,pH值改變,部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性,引起細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)紊亂,溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶,使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)成分造成破壞,線粒體腫脹,功能丟失,并造成能量代謝障礙。胞膜上的類(lèi)脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變,使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。如果細(xì)胞內(nèi)冰晶形成較多,隨冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成細(xì)胞核DNA空間構(gòu)型發(fā)生不可逆的損傷,而致細(xì)胞死亡。因此,細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點(diǎn)下降,提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,且對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會(huì),從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū) JB6 clone 30, subclone 7b細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB6 Cl 30細(xì)胞、RS4;11細(xì)胞、RC92A細(xì)胞 JB 6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1417細(xì)胞、16-HBE細(xì)胞、FC33細(xì)胞 MCF10A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H647細(xì)胞、GP5d細(xì)胞、CV-1.K細(xì)胞 JB6 Cl 30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-435細(xì)胞、HEY-A8細(xì)胞、NCIH1184細(xì)胞 Malme-3 M細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS-62細(xì)胞、NS1-Ag 4/1細(xì)胞、SRS-82細(xì)胞 Transformed Human Liver Epithelial-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRCC細(xì)胞、TE-1細(xì)胞、S.B.細(xì)胞 293T/17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-DHL-16細(xì)胞、IPEC1細(xì)胞、H1693細(xì)胞 HMEL Cell:永生上皮細(xì)胞系 H-1299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T98G細(xì)胞、P116細(xì)胞、MFE 296細(xì)胞 PLC/PRF/5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos.G6.C10細(xì)胞、HEY A8細(xì)胞、OS-RC-2細(xì)胞 CTX TNA2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB-6 Cl 30細(xì)胞、USMC細(xì)胞、C-32細(xì)胞 H-295細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RDES-1細(xì)胞、LOU-NH91細(xì)胞、T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細(xì)胞 JC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H157細(xì)胞、THEECs細(xì)胞、MDCKII-WT細(xì)胞 HANK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJAB-1細(xì)胞、HCT/FU細(xì)胞、SUP-B1細(xì)胞 SUIT-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K1735細(xì)胞、GalK 1細(xì)胞、HLCL9B10細(xì)胞 MIN-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC090細(xì)胞、DCS細(xì)胞、Caov-4細(xì)胞 Me-Wo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM細(xì)胞、HO1-N-1細(xì)胞、SW837細(xì)胞 HONE-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PG-4 S+L-細(xì)胞、GM05372E細(xì)胞、H1522細(xì)胞 HBL-100細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS-I/1細(xì)胞、SKMel-28細(xì)胞、Hs27細(xì)胞 NCI-322細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2171細(xì)胞、H226細(xì)胞、NCI-H460細(xì)胞 FOX-NY細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-875細(xì)胞、C8161細(xì)胞、MLO-Y4細(xì)胞 Suzhou Human Glioma-44細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:52PE細(xì)胞、H-157細(xì)胞、B16 melanoma F10細(xì)胞 MCF7-CTRL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK HEP-1細(xì)胞、RS411細(xì)胞、Caco-2細(xì)胞 SGC996細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEI-193細(xì)胞、HDF-a細(xì)胞、SNU-407細(xì)胞 OVCA8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03320細(xì)胞、RCC-10細(xì)胞、hA549細(xì)胞 CD18/HPAF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB-9細(xì)胞、RL95-2細(xì)胞、Chinese Hamster Lung細(xì)胞 NOMO-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:786-O細(xì)胞、CII細(xì)胞、HEK293T/17細(xì)胞 FRO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H441-4細(xì)胞、hUC-MSC細(xì)胞、H716細(xì)胞 MASMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-468-RED細(xì)胞、K562/ADR細(xì)胞、RPMI8226細(xì)胞 CCD 966 SK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2780 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