"BT Cell:新生牛鼻甲細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:鼻甲;自發(fā)永生;Holstein CAMA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 51細(xì)胞、TSU-Pr1細(xì)胞、H929細(xì)胞 COLO 16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EFM192C細(xì)胞、MSTO-211H細(xì)胞、MES23.5細(xì)胞 Tokyo Medical and Dental university 8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEK細(xì)胞、HB 611細(xì)胞、FLC-7細(xì)胞 WC00044細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK 293 EBNA細(xì)胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細(xì)胞、MDA-175細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 BT Cell:新生牛鼻甲細(xì)胞系 細(xì)胞消化過程總結(jié):其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個特性,無論死活的細(xì)胞都是如此,你可以嘗試,準(zhǔn)備100%的單個細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個幾個細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑,這個是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開)。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個時候即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個細(xì)胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間,或者像有的同學(xué)那樣吹打1h,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細(xì)胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過5min,即可見細(xì)胞成片移動,就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會有難消化的時候,比如tsDC細(xì)胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 造成實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞污染常見情況總結(jié):細(xì)胞培養(yǎng)中最常見污染的是細(xì)菌、真菌和支原體污染。細(xì)胞一旦污染,大多數(shù)較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會造成細(xì)胞污染呢?我們根據(jù)常見細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析總結(jié)下。【違規(guī)操作】1)為節(jié)省時間,有人已經(jīng)用超凈臺四個多小時,不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗(yàn);2)器材或者溶液很久沒用,未檢測是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;3)超凈臺不點(diǎn)酒精燈;點(diǎn)了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗(yàn);4)不帶手套,徒手操作;5)細(xì)胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術(shù)器械、離心機(jī)、冰箱等專用儀器設(shè)備以及專用的實(shí)驗(yàn)服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細(xì)胞使用。培養(yǎng)細(xì)胞過程中使用的所有實(shí)驗(yàn)用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺和桌面,東西太多太亂:超凈臺不是儲物箱,什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺!這樣就會有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。傳代細(xì)胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標(biāo)簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細(xì)胞!一不小心“飄”進(jìn)你的細(xì)胞培養(yǎng)板里,細(xì)胞就會養(yǎng)的不好,啥時候死了都不知道!【培養(yǎng)箱太久沒清潔】細(xì)胞污染了,并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,首先你還得看看這個恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細(xì)胞是否污染,如果有而且好幾個板子都有類似的污染塊,那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,得給培養(yǎng)箱做個大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個月的就用酒精擦擦托盤?!緜鞔?xì)胞人多口雜,難管理】在傳代細(xì)胞這種衛(wèi)生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗(yàn)在無菌條件下操作。出入試驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)服當(dāng)風(fēng)衣穿,不扣紐扣,不戴,就容易造成細(xì)胞污染;超凈臺做實(shí)驗(yàn)時,喜歡說話聊著做試驗(yàn),要是還不帶口罩,里面就有很多細(xì)菌等著去攻擊你的細(xì)胞呢! 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 CORL23細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DoTc2細(xì)胞、Madin Darby Bovine Kidney細(xì)胞、RF/6A細(xì)胞 Ramos 2G6.4C10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NSI/1-Ag4-1細(xì)胞、Hx147細(xì)胞、no.11細(xì)胞 HCC-78細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H358細(xì)胞、RPMC細(xì)胞、L-Wnt-3A細(xì)胞 SW620細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Granta 519細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-436細(xì)胞、Vero-76細(xì)胞 COLO684細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GP5d細(xì)胞、MDA134細(xì)胞、SNUC1細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁 BT Cell:新生牛鼻甲細(xì)胞系 貼壁細(xì)胞的消化方法介紹:1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細(xì)胞間。配制時不能用含、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時,從組織消化下細(xì)胞。這種方法作用溫和,對細(xì)胞損傷較小,但是,價格也較貴。中止同樣是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細(xì)胞與間質(zhì),對細(xì)胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細(xì)胞要洗一遍。4、商品化的無酶消化液。個人的使用經(jīng)常覺得對細(xì)胞的損傷比較大,但是分離成單細(xì)胞懸液的能力確實(shí)比較強(qiáng)。5、物理法。直接吹打或用細(xì)胞刮子將細(xì)胞刮下來。6、冷凍法。此方法僅能用于細(xì)胞傳代時。無法使組織上的細(xì)胞脫落下來。本方法的原理,我想是因細(xì)胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點(diǎn)是:對細(xì)胞損傷小,不需要中止或洗細(xì)胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細(xì)胞。不足是細(xì)胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡操作的間充質(zhì)干細(xì)胞、DC細(xì)胞的培養(yǎng),效果非常滿意。具體過程是:1、用較多的4度的PBS 洗滌一遍細(xì)胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,靜置操作臺上,很快細(xì)胞就小片脫落,3、輕輕吹打,細(xì)胞即完全脫落,4、按一定比例傳代。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 SKNO1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-175VII細(xì)胞、HCC-1937細(xì)胞、CT26細(xì)胞 H1184細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV-CA 432細(xì)胞、KCL22S細(xì)胞、YAC細(xì)胞 GM03573細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L5178Y TK+/-3.7.2c細(xì)胞、GM03320細(xì)胞、H-2141細(xì)胞 RIN Cl-5F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNB19細(xì)胞、HCC9204細(xì)胞、GM15452細(xì)胞 Alpha Mouse Liver 12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTC-1細(xì)胞、COV-362細(xì)胞、EAhy 926細(xì)胞 P-815細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-X63-Ag8細(xì)胞、Human fetal lung fibroblast 1細(xì)胞、Panc-327細(xì)胞 GA-10-Clone-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGH-U3細(xì)胞、NCIH2135細(xì)胞、SKLMS-1細(xì)胞 BT Cell:新生牛鼻甲細(xì)胞系 Hep G2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKLU1細(xì)胞、NCI-H187細(xì)胞、C8166-CD4細(xì)胞 LS411N細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-510細(xì)胞、GM2219C細(xì)胞、MC-CAR細(xì)胞 Duke University 4475細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-190PT細(xì)胞、EM3細(xì)胞、CMT64細(xì)胞 Hs729細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 08.13細(xì)胞、HONE1細(xì)胞、MC3T3-E細(xì)胞 HOC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2073細(xì)胞、293S細(xì)胞、H1648細(xì)胞 H650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K1細(xì)胞、SK HEP 01細(xì)胞、RLE-6TN細(xì)胞 KNS42細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MV4II細(xì)胞、HCC0095細(xì)胞、NCI-H526細(xì)胞 Be-Wo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-022細(xì)胞、SIRC細(xì)胞、3T3(A31)細(xì)胞 IEC-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McA-RH7777細(xì)胞、CTV1細(xì)胞、Kit 225細(xì)胞 IEC-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McA-RH7777細(xì)胞、CTV1細(xì)胞、Kit 225細(xì)胞 RBL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MMAc.SF細(xì)胞、NK92MI細(xì)胞、H747細(xì)胞 NALM-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCCJF細(xì)胞、NIH:OVCAR3細(xì)胞、MCF.7細(xì)胞 LLC-MK-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-9細(xì)胞、SN12CPM6細(xì)胞、NCI-H1734細(xì)胞 Pro-5 Lec1.3c細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuH28細(xì)胞、VM Cub 1細(xì)胞、HS-294T細(xì)胞 RPMI-1846細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs940.T細(xì)胞、NCI-HUT-125細(xì)胞、HUASMC細(xì)胞 RPMI 6666細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOV-112細(xì)胞、Fetal Human Colon細(xì)胞、NCI-H1437細(xì)胞 KYSE 270細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOP92細(xì)胞、Hs739T細(xì)胞、G-361細(xì)胞 Raji細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VAESBJ細(xì)胞、Hs737T細(xì)胞、HGC-27細(xì)胞 I90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES 13細(xì)胞、SW1463細(xì)胞、INS-1細(xì)胞 MLA-144細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1963細(xì)胞、WEHI 231細(xì)胞、P3X63Ag8653細(xì)胞 MCA-38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MILE SVEN 1細(xì)胞、MOLT 3細(xì)胞、OCI Ly10細(xì)胞 MCA-38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MILE SVEN 1細(xì)胞、MOLT 3細(xì)胞、OCI Ly10細(xì)胞 Mel526細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-MS細(xì)胞、KCL-22細(xì)胞、KRC/Y細(xì)胞 NCI-H1522細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H441細(xì)胞、GM03671細(xì)胞、SK-HEP-1細(xì)胞 NCIH2141細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Large Cell Lung Cancer-103H細(xì)胞、BJAB-1細(xì)胞、MESSA-DX5細(xì)胞 brain-derived Endothelial cells.3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NH-6細(xì)胞、RPMI 7951細(xì)胞、OCI-Ly 3細(xì)胞 MC3T3-E1(C4)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHCRC subclone 11細(xì)胞、PC 61.5.3細(xì)胞、P388D1細(xì)胞 DHL-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLMA細(xì)胞、H719細(xì)胞、A549/DDP細(xì)胞 GM3569細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3.NS-1/1.Ag4.1細(xì)胞、MDA-MB361細(xì)胞、KNS-81細(xì)胞 IGR-OV1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1734細(xì)胞、EMT6細(xì)胞、MFD-1細(xì)胞 CT26WT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAW-264.7細(xì)胞、hRMECs細(xì)胞、P3JHR-1細(xì)胞 CHO-ori細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FL 62891細(xì)胞、X63-Ag 8.6.5.3細(xì)胞、HCASMC細(xì)胞 SCL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-415細(xì)胞、4175細(xì)胞、TFK-1細(xì)胞 EC-GI-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-180細(xì)胞、NOR10細(xì)胞、P31FUJ細(xì)胞 HBVP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1793細(xì)胞、Panc-8_13細(xì)胞、Reuber H35細(xì)胞 HO1-N-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:143TK-細(xì)胞、NCIH847細(xì)胞、YD15細(xì)胞 H226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1882細(xì)胞、SK N SH細(xì)胞、CEM.C1細(xì)胞 BpRcl細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTR-8/SV neo細(xì)胞、NCI-H508細(xì)胞、ARH 77細(xì)胞 HCC 38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCTC1469細(xì)胞、Ku812細(xì)胞、NCI-H2171細(xì)胞 ETCC-007細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL-92-1-7細(xì)胞、UT-7細(xì)胞、HCC1187細(xì)胞 32D CL3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H87細(xì)胞、Colo-201細(xì)胞、DAKIKI Clone 1細(xì)胞 SVEC 4-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-711細(xì)胞、RMG-1細(xì)胞、GLC-82細(xì)胞 HCC0095細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ha Fe細(xì)胞、L-1210細(xì)胞、VMRCLCD細(xì)胞 BT Cell:新生牛鼻甲細(xì)胞系 Rat-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00215A細(xì)胞、MDA231細(xì)胞、KU-812-F細(xì)胞 hUC-MSC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH378細(xì)胞、CHO-ori細(xì)胞、MXI細(xì)胞 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