p3xFlag-CMV-14表達(dá)載體是一個(gè)6.3 kb的載體,從pCMV5載體衍生而來(lái),用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)瞬表達(dá)或穩(wěn)表達(dá)C末端帶有3xFlag標(biāo)簽的融合蛋白。載體多克隆位點(diǎn)下游片段編碼了三個(gè)相鄰Flag抗原表位(Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp)。這使得能夠使用Flag M2抗體檢測(cè)蛋白表達(dá)情況。
載體上的人類巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus)啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)域促進(jìn)了Flag融合蛋白基因的轉(zhuǎn)錄.氨基糖苷類磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(Neo)使得載體具有耐氨基糖苷類例如為G418的能力,允許篩選轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞株。
pP3XFLAG-CMV-14表達(dá)載體是大腸桿菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的穿梭載體。當(dāng)使用SV40 T抗原表達(dá)的宿主細(xì)胞系,如COS細(xì)胞,復(fù)制和基因組整合效率能夠達(dá)到狀態(tài)。
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