pCMV-GFP-LC3B

pCMV-GFP-LC3B是信裕生物自行研發(fā)的在哺乳動物細胞中表達GFP標簽的人源LC3B 融合蛋白的質粒。該質粒含有CMV啟動子，為卡那霉素抗性，轉染細胞后能夠在靶細胞中高效表達綠色熒光蛋白GFP標簽的LC3B的融合蛋白，呈現(xiàn)明亮的綠色熒光，可以用于細胞自噬(autophagy)的研究。本質粒轉染細胞后，可以使用G418篩選穩(wěn)定表達融合蛋白的細胞株。
LC3是酵母自噬關鍵蛋白ATG8在哺乳動物中的同源蛋白。LC3最初被分析鑒定為microtubule-associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3)。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亞家族，其中對于LC3B的研究最為廣泛。到目前為止，LC3B被認為是細胞自噬信號通路最為關鍵的標志性蛋白。LC3B是一個具有125個氨基酸殘基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22個氨基酸蛋白，從而暴露出C端的甘氨酸，人們把它命名為胞質形式的LC3B I。在細胞自噬的過程中，其C端暴露的甘氨酸經過一個類似泛素化的過程，以ATG7為E1樣激活酶(E1-like activating enzyme)，以ATG3為E2樣連接酶(E2-like conjugation enzyme)，以Atg12-Atg5-Atg16復合物為E3樣連接酶(E3-like ligase)，在C端甘氨酸上共價連接上磷脂酰(phosphatidylethanolamine, PE)而成為LC3B-PE即LC3B II。與胞質定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬體(autophagosome)的內膜和外膜上。在自噬體與溶酶體融合后，自噬體外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬體內膜上的LC3B II則被溶酶體內的蛋白酶所降解。盡管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其極強的疏水性，在SDS-PAGE電泳時，LC3B II比LC3B I遷移得更快，其表觀分子量分別為14kD和16kD。在用pCMV-GFP-LC3B轉染細胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細胞質中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點的形式表現(xiàn)出來(LC3B dots or punctae)。
自噬(Autophagy)是一種在進化上高度保守的通過溶酶體吞噬并降解部分自身組分的細胞內分解代謝途徑。自噬與多種生理功能有關，在饑餓等不利的環(huán)境條件下，細胞通過自噬降解多余或異常的細胞內組分，為細胞的生存提供能量及原材料，促進生物體的生長發(fā)育、細胞分化及對環(huán)境變化產生應答。自噬異常與多種病理過程如腫瘤、神經退行性疾病、代謝疾病、病原體感染等都有密切關系。由于細胞自噬在生理和病理過程中都有重要作用，自噬已經成為細胞生物學領域的一個新的研究熱點。
pCMV-GFP-LC3B質粒的主要信息如下：

pCMV-GFP-LC3B質粒(5402bp)的圖譜如下：

pCMV-GFP-LC3B表達基因的詳細圖譜如下：

pCMV-GFP-LC3B中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pCMV-GFP-LC3B)包括：

pCMV-GFP-LC3B中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pCMV-GFP-LC3B once)包括：

pCMV-GFP-LC3B質粒中推薦使用的測序引物序列如下：
T3 primer (620-639): 5´-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3´
T7 primer (1904-1925): 5´-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3´
pCMV-GFP-LC3B的全序列信息請參考信裕生物網站上該質粒的信息。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
本質粒未經信裕生物書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。