福爾根DNA染色液(Feulgen stain)
貨號(hào)：RS1710
規(guī)格：3×50ml/3×100ml
保存：4℃，避光，6個(gè)月
試劑盒組成：
簡(jiǎn)介：
脫氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基綠-派洛寧法、吖啶橙熒光法等，其中最經(jīng)典的是Feulgen法, Feulgen法是一種經(jīng)典的酶組織化學(xué)法。
Feulgen stain 的原理在于：DNA經(jīng)溫和的弱酸(例如鹽酸)水解后，嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打開(kāi)，并且使脫氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開(kāi)，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。醛基在原位與Schiff reagent結(jié)合，形成紫紅色化合物，使細(xì)胞內(nèi)含有DNA的部位呈紫紅色。紫紅色的產(chǎn)生是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)有醌基（醌基是一個(gè)具有顏色的發(fā)色團(tuán)），所以凡含有DNA的部位，就呈紫紅色。但是該水解作用不影響核糖-嘌呤結(jié)合鍵，因此RNA用此法處理后則分解，所以該法不適用于證明RNA。
操作步驟（僅供參考）：
(一) 石蠟切片染色
1、 組織固定：Carnoy固定的石蠟切片較好，10%的福爾馬林亦可，不宜使用Bouin固定液。
2、 弱酸工作液的配制：
按照弱酸溶液:蒸餾水=1:4的比例配制，即取弱酸溶液1份、蒸餾水4份，充分混合，即獲得弱酸工作液。
3、 石蠟切片脫蠟至雙蒸水。
4、 切片室溫下在弱酸工作液中浸洗一下。
5、 切片放入已預(yù)熱到60℃的弱酸工作液，孵育8min。
6、 切片放入室溫的弱酸工作液中沖洗1min。
7、 蒸餾水沖洗。
8、 切片入Schiff reagent內(nèi)，置于室溫暗處染色30~60min。
9、 在上述染色過(guò)程中，配制SO2水工作液。
按照亞硫酸鹽溶液：弱酸溶液：蒸餾水=5:1:94的比例配制SO2水工作液，即取亞硫酸鹽溶液5份、弱酸溶液1份、蒸餾水94份，充分混合，即獲得SO2水工作液。即配即用，不易久置。
10、 用新鮮配制的SO2水工作液洗切片3次，每次90s。
11、蒸餾水中洗凈。
12、經(jīng)系列乙醇脫水。
13、二甲苯透明并封片。
(二)冰凍切片染色
1、 冰凍切片預(yù)處理：先用乙酸1份、無(wú)水乙醇3份混合后，即為固定液，固定10min。
2、 由無(wú)水乙醇脫水--逐級(jí)下行--雙蒸水。
3、 弱酸工作液的配制：
按照弱酸溶液:蒸餾水=1:4的比例配制弱酸工作液，即取弱酸溶液1份、蒸餾水4份，充分混合，即獲得弱酸工作液。
4、 余下步驟同上述石蠟切片染色。
染色結(jié)果：
細(xì)胞核內(nèi)DNA 紅紫色
陰性對(duì)照： 將同樣切片經(jīng)上述步驟， 只有步驟5改為放入室溫的弱酸工作液，室溫放置15min。其結(jié)果為細(xì)胞核DNA陰性。
注意事項(xiàng)：
- 水解時(shí)間很重要，并且應(yīng)使用恰當(dāng)?shù)墓潭〞r(shí)間。不同的固定液水解時(shí)間不一樣。
2、 注意Schiff reagent的純凈程度，若變淺粉紅亦可考慮使用，顏色變紅則不能用。
3、 去除切片上多余的Schiff reagent的方法應(yīng)以SO2水洗法為好。
4、 應(yīng)作陰性對(duì)照試驗(yàn)。
5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： 福爾根；DNA染色；Feulgen stain
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