產品名稱：PhyScript™ 2×SYBR Green PCR Mastermix

貨號：PH0120

規(guī)格：50T（1.25mL） | 200T（4×1.25mL）

存儲：本產品-20℃保存有效期至少一年，4℃可保存 3 個月。解凍后應充分混勻，避免產生大量氣泡。

別名：實時熒光定量PCR試劑盒;Quantitative Real-time PCR Kit;Realtime PCR Kit；RT-PCR Kit

試劑組分：2×SYBR Green PCRmix 含有 PCR Buffer、MgCl2、dNTPs、HS Taq DNA Polymerase、SYBRGreen I、穩(wěn)定劑等成分。

產品簡介

 2×SYBR Green PCRmix 是采用 SYBR Green ?0?9 嵌合熒光法進行 Real Time PCR 的專用試劑。含有常溫下完全封閉 Taq 酶活性的化學修飾法熱啟動 HS Taq DNA Polymerase，能夠有效抑制低溫條件下引物非特異性退火或者引物二聚體引起的非特異性擴增，提高擴增反應的特異性。本試劑經過特殊配制，采用優(yōu)化配方的 qPCR 專用 Buffer，大大提高了 qPCR 反應的擴增效率和檢測靈敏度，可以在較寬的定量區(qū)域內得到良好的標準曲線，準確進行定量。本試劑與多數(shù)廠家的熒光定量 PCR儀兼容，如 Applied Biosystems、 Eppendorf 、Bio-Rad 和 Roche 等。

產品特性

高特異性：本產品采用熱啟動 DNA 聚合酶，90℃以上 2min 后具有擴增活性，可大大提高 PCR 產物的特 異性。 靈敏度：本產品包含的優(yōu)化的緩沖液可檢測低拷貝數(shù)的模板，且重復性好。 高適用性：本產品可適用于任意熒光定量 PCR 儀。

試劑原理

本產品利用化學修飾熱啟動酶 HS Taq DNA polymerase 進行 qPCR 擴增反應，通過擴增產物嵌合 SYBR Green ?0?9 而激發(fā)的熒光信號強度進行檢測。

1、PCR

PCR 法是以微量 DNA 進行目的片段擴增的方法。通過 DNA 鏈的熱變性、引物退火、DNA 聚合酶作用下引物的延伸三個步驟循環(huán)往復，可在短時間內擴增大量 DNA 片段。

2、熒光檢出

SYBR Green I 是一種結合于小溝中的雙鏈 DNA 結合染料。與雙鏈 DNA 結合后，其熒光大大增強，吸收波長約為 497nm，發(fā)射波長約為 520nm。SYBR Green I 可以與所有的雙鏈 DNA 相結合，無需使用探針，即可實現(xiàn)檢測，通用性好，且靈敏度很高。但是，由于 SYBR Green I 與所有的雙鏈 DNA 相結合，因此由引物二聚體、單鏈二級結構以及錯誤的擴增產物引起的假陽性會影響定量的精確性。在定量儀器檢測過程中，可以通過測量升高溫度后熒光的變化，由解鏈曲線來分析產物的均一性，從而區(qū)分產物的融解峰溫度而區(qū)分特異與非特異的產物。

注意事項

1、2×SYBR Green PCRmix 經過特殊配制，采用化學修飾熱啟動酶，具有更高特異性；

2、對于退火溫度較低的引物或超過 200bp 長片段擴增建議采用三步法；

3、擴增前后要使用專用的區(qū)域和移液器，戴手套操作并經常更換，PCR反應完成后切勿打開反應管。以限度的減少PCR產物對樣品的污染。