基于國際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)流程，維洛信現(xiàn)提供介導(dǎo)RNA干擾的慢病毒制備服務(wù)。我們采用第三代包裝系統(tǒng)系統(tǒng)在293T細(xì)胞中進(jìn)行慢病毒的生產(chǎn)與包裝，并建立了完善的純化和質(zhì)控方法，生產(chǎn)的慢病毒顆?？芍苯討?yīng)用于各類體內(nèi)體外試驗(yàn)。
RNA干擾（RNA interference, RNAi）是借助雙鏈RNA（dsRNA）引發(fā)的同源mRNA高效特異性降解、導(dǎo)致基因沉默的現(xiàn)象。RNAi技術(shù)即為在靶細(xì)胞中導(dǎo)入外源dsRNA，生成小分子干擾RNA（siRNA）以達(dá)到特異性剔除或沉默某個基因的表達(dá)。將針對siRNA設(shè)計(jì)的shRNA裝載入慢病毒載體中，進(jìn)而高效感染細(xì)胞或動物，是人工RNAi的一項(xiàng)主要技術(shù)。借助慢病毒的感染能力，不僅宿主細(xì)胞范圍大大擴(kuò)大，shRNA也能夠更加高效、穩(wěn)定的轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)長期穩(wěn)定的RNAi效果。
慢病毒優(yōu)勢：
1. 廣泛宿主細(xì)胞：與逆轉(zhuǎn)錄載體不同，能夠感染分裂期與靜止期細(xì)胞；包膜質(zhì)粒使用皰疹病毒VSVG蛋白，宿主范圍更廣，包括神經(jīng)元細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、心肌細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞。
2. 極強(qiáng)感染能力：慢病毒載體具有極高的感染效率，尤其適用于難轉(zhuǎn)染的神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞、原代細(xì)胞和其他不分化細(xì)胞。
3. 長期穩(wěn)定表達(dá)：外源基因整合入基因組，實(shí)現(xiàn)持久性表達(dá)，可應(yīng)用于構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系、制備轉(zhuǎn)基因動物等。
4. 低免疫原性：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)不易造成非特異性反應(yīng)與免疫抑制。
5. 高安全系數(shù)：尚未發(fā)現(xiàn)對人的致病性，已被應(yīng)用于臨床治療；采用三質(zhì)粒包裝系統(tǒng)，去除致病基因和輔助序列，包裝質(zhì)粒和載體質(zhì)粒盡量降低同源性，進(jìn)一步提高了生物安全性。
服務(wù)流程：
1. 方案溝通
2. 基因克隆：針對目的基因ORF設(shè)計(jì)3-4個靶點(diǎn)，將對應(yīng)shRNA構(gòu)建入我們的專有慢病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒，測序驗(yàn)證
3. 病毒包裝：三代慢病毒包裝系統(tǒng)（轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pLV-MNG + 包裝質(zhì)粒 + 包膜質(zhì)粒）共轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞
4. 收毒：48 h、72 h孵育后收獲培養(yǎng)上清
5. 純化濃縮：超速離心+超濾， 去除雜質(zhì)蛋白和DNA；根據(jù)不同要求，我們還可應(yīng)用切向流過濾、離子交換層析、蔗糖梯度離心等方式進(jìn)一步純化與濃縮
6. 質(zhì)量控制：
- 多重酶切質(zhì)粒鑒定
- p24 ELISA核心蛋白定量
- 細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)檢測（帶有熒光標(biāo)簽）
- qPCR檢測病毒滴度
交付內(nèi)容：
定制慢病毒顆粒
對照病毒（可用于轉(zhuǎn)導(dǎo)測試）
詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
維洛信慢病毒平臺：
1. 三代慢病毒包裝系統(tǒng)與嚴(yán)格制備工藝，力求獲取滴度、活性、純度與一致性的慢病毒產(chǎn)品
2. 多種優(yōu)化啟動子（CMV, H1, U6等）與報(bào)告基因（EGFP、mCherry、EYFP等）或藥篩基因（Neo, Puro, Hygromycin等）可供選擇，滿足您的不同需求
3. 滴度高：維洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒，滿足大部分實(shí)驗(yàn)的使用要求
4. 靈活生產(chǎn)：我們提供體外應(yīng)用級別與體內(nèi)應(yīng)用級別各種規(guī)格的病毒（小規(guī)格、中規(guī)格、大規(guī)格）的制備服務(wù)
5. 具有競爭力的價格與貨期
了解更多慢病毒服務(wù)，請撥打137-1756-5893咨詢我們。
關(guān)鍵字： RNA干擾慢病毒制備
北京維洛信生物科技有限公司成立于2019年，是北京百泰派克生物科技有限公司旗下病毒技術(shù)服務(wù)平臺，主要為國內(nèi)外各各科研院所，高校，藥企，生物工程類企業(yè)提供載體構(gòu)建、病毒包裝等生物學(xué)技術(shù)服務(wù)與產(chǎn)品?；谙冗M(jìn)的腺病毒、腺相關(guān)病毒與慢病毒技術(shù)平臺，我們致力于快速、高純度、高滴度、高感染活力的病毒顆粒制備與生產(chǎn)，并結(jié)合客戶需求與應(yīng)用領(lǐng)域，定制高效、高性價比的一站式服務(wù)。