產(chǎn)品描述
全血直接PCR試劑盒（Animal Blood Direct PCR Kit）可以直接對全血樣本進行PCR，無需DNA提取或樣品處理，大大降低了污染風險，縮短了檢測時間。
試劑盒中包含配方優(yōu)化的2× Blood Master Mix，具有很強抑制物耐受性，人血的模板加入量可達45%，鼠血的可達20%，可以靈敏的擴增血液樣本中基因組和外源目的DNA片段。2× Blood Master Mix包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，擴增產(chǎn)物末端加A，適用于Hieff Clone™快速克隆試劑盒（貨號：10907ES60/10908ES60）。
該試劑盒可用于直接擴增的血樣類型包括：新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血漬，且兼容所有常規(guī)抗凝劑（EDTA、檸檬酸鹽、肝素等）。適用樣本來源包括人血、鼠血、雞血、鳥血、牛血、狗血等。
產(chǎn)品組分
a）2× Blood Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、PCR反應增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。
b）6× DNA Loading buffer：不含SDS。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。避免反復凍融。
操作方法
1. PCR反應體系配制
注：使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a）模板使用量：進行基因組上的目的片段檢測，建議使用少量的血液量作為模板；檢測血液樣本中某種病毒或細菌等的目的片段，建議擴大PCR體系并使用較大量的血液模板。血液模板最多占PCR體系的45%（人血）、20%（鼠血）。若模板使用含有血液的采集卡，可截取直徑1-4 mm的血點，直接加入20-50 μL PCR反應體系進行擴增。
b）引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-0.5 μM之間進行調整。
c）反應體系：推薦使用20 μL或 50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
d）體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。
2. PCR反應條件設置
a）預變性：95℃，5 min可以讓白細胞裂解，釋放可用于PCR擴增的基因組DNA。請勿縮短時間或降低溫度。
b）退火溫度：退火溫度設置為引物Tm值即可。然而，使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴增，并提高全血模板的擴增效率。因此，如擴增產(chǎn)物特異性較差，可以建立一個溫度梯度反應去尋找引物模板最適退火溫度。
c）延伸時間：按30 sec/kb設定，如不足30 sec，設置30 sec即可。
d）擴增循環(huán)數(shù)：35個循環(huán)已可以擴增足量產(chǎn)物。太多的循環(huán)將會導致非特異性擴增增加。
關鍵字： 全血直接PCR試劑盒_PCR試劑盒_PCR_
上海翊圣生物科技有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd.）成立于2009年，是專注于酶制劑和抗原抗體開發(fā)的高新技術型企業(yè)，致力于為生命科學研究領域內的科研客戶及精準醫(yī)療相關行業(yè)的工業(yè)客戶提供高質量的產(chǎn)品和優(yōu)質的服務。
公司現(xiàn)階段建設有分子、蛋白、細胞和免疫四大技術平臺，涵蓋全面豐富的產(chǎn)品線，包括PCR、qPCR、高保真DNA聚合酶、逆轉錄相關制劑、克隆試劑盒、高通量測序MaxUP系列DNA和RNA建庫試劑盒、細胞培養(yǎng)、支原體檢測/預防/去除試劑，以及體外診斷相關的酶原料、試劑和磁珠等3000多種試劑和試劑盒，服務于全國各級高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測機構、生物醫(yī)藥公司等2.5萬家客戶，助力發(fā)表高質量SCI論文1000余篇。
未來，我們仍