馬兜鈴酸 I 和馬兜鈴內(nèi)酰胺 I 在培養(yǎng)的腎上皮細胞中的毒性。

馬兜鈴酸腎病是一種進行性腎小管間質(zhì)性腎病，主要由馬兜鈴酸 I （AA-I） 中毒引起。馬兜鈴內(nèi)酰胺 I （AL-I） 是 AA-I 的主要代謝產(chǎn)物，也可能參與導致腎損傷的過程。
方法和結(jié)果：
為了研究馬兜鈴內(nèi)酰胺 I 介導的細胞毒性的作用和機制，我們確定并比較了 AA-I 和馬兜鈴內(nèi)酰胺 I 對人近端腎小管上皮 （HK-2） 細胞系細胞的細胞毒作用。為此，我們用 AA-I 和馬兜鈴內(nèi)酰胺 I 處理 HK-2 細胞，并使用 3-（4,5-二甲基-噻唑-2-基）-2,5-二苯基-四唑溴化物 （MTT） 測定、流式細胞術(shù)和測定半胱天冬酶 3 活性的測定來評估這些藥物的細胞毒性。HK-2 細胞的增殖以濃度和時間依賴性方式受到抑制。細胞周期分析顯示細胞停滯在 S 期。膜聯(lián)蛋白 V/碘化丙啶 （PI） 測定的結(jié)果和亞 G1 峰的出現(xiàn)證明了細胞凋亡。此外，AA-I 和 AL-I 以濃度依賴性方式增加 caspase 3 樣活性。
結(jié)論：
這些結(jié)果還表明，馬兜鈴內(nèi)酰胺 I 的細胞毒效能高于 AA-I，并且這些分子的細胞毒作用是通過在半胱天冬酶 3 依賴性途徑中誘導細胞凋亡介導的。

馬兜內(nèi)酰胺 I 誘導的腎近端腎小管上皮細胞損傷

研究馬兜鈴內(nèi)酰胺 I （AL-I） 是否誘導人腎近端腎小管上皮細胞損傷。
方法和結(jié)果：
以培養(yǎng)的人腎近端腎小管上皮細胞系 HK-2 為對象。馬兜鈴酸 I （AA-I） 用作陽性對照。通過 LDH 釋放率檢測馬兜鈴內(nèi)酰胺 I 的細胞毒性。通過細胞形態(tài)、DNA 含量和細胞膜磷脂酰絲氨酸 （PS） 的表達來評估細胞凋亡。ELISA 檢測 HK-2 細胞中纖連蛋白 （FN） 和 TGF-β1 的分泌水平。馬兜內(nèi)酰胺 I 對 HK-2 具有劑量依賴性毒性，從 2.5 mg x mL（-1） 到 20 mg x mL（-1）;在這些濃度范圍內(nèi)，馬兜內(nèi)酰胺 I 可以誘導細胞凋亡，這可以通過測量形態(tài)、DNA 含量和 PS 的表達來檢測。馬兜鈴內(nèi)酰胺 I 細胞毒性的效力高于相同濃度下的 AA-I。馬兜內(nèi)酰胺 I 對細胞凋亡、FN 分泌和 TGF-β1 的影響均弱于 AA-I。
結(jié)論：
馬兜鈴內(nèi)酰胺 I 作為體內(nèi) AA-I 的一種代謝產(chǎn)物，誘導腎近端腎小管細胞的直接損傷。它的效果類似于 AA-I 的效果。馬兜內(nèi)酰胺 I 可能是含有 AA 的中草藥中的有毒代謝產(chǎn)物之一，參與腎損傷和纖維化。

馬兜內(nèi)酰胺-I 觀察人腎近端腎小管上皮細胞的滲透、分布和積累

研究馬兜鈴內(nèi)酰胺 I （AL-I） 是否可以進入腎近端腎小管上皮細胞以及細胞內(nèi)分布和積累的情況。
方法和結(jié)果：
以培養(yǎng)的人腎近端腎小管上皮細胞系 （HK-2） 為研究對象。用不同濃度的馬兜內(nèi)酰胺 I 處理后，通過熒光顯微鏡檢查馬兜內(nèi)酰胺 I 的細胞內(nèi)熒光及其分布，在洗掉含有馬兜內(nèi)酰胺 I 的培養(yǎng)基后，還通過細胞在不含馬兜內(nèi)酰胺 I 的培養(yǎng)基中孵育 48 小時研究馬兜內(nèi)酰胺 I 的細胞內(nèi)積累。馬兜內(nèi)酰胺 I （濃度從 5 μg x mL（-1） 到 20 μg x mL（-1））處理后，0.5 h 可在腎近端腎小管上皮細胞內(nèi)觀察到青光熒光，熒光僅分布在細胞質(zhì)中，而在細胞核中未觀察到。此外，在洗掉含有馬兜內(nèi)酰胺 I 的培養(yǎng)基后，馬兜內(nèi)酰胺 I 的熒光可以在細胞質(zhì)中保持 48 小時以上。
結(jié)論：
馬兜內(nèi)酰胺 I 能在短時間內(nèi)進入腎近端腎小管上皮細胞并積聚在細胞質(zhì)中，但不能進入細胞核。這種特性可能有助于馬兜內(nèi)酰胺 I 誘導的腎損傷的細胞毒機制，這可能部分解釋了 AAs 及其代謝物在馬兜鈴酸腎病發(fā)展中的持續(xù)腎毒性。