確定細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的高低非常重要，通過特異的核酸轉(zhuǎn)染指示劑轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞核并結(jié)合兩種染料，可以精確定量地分析轉(zhuǎn)染效率及細(xì)胞毒性。
riboMONITOR?轉(zhuǎn)染指示劑試劑盒包含3種染料：riboTRACER? Green、NUCLEOstain?和DEADstain?，分別是用于檢測(cè)成功轉(zhuǎn)染細(xì)胞、全部細(xì)胞和死亡細(xì)胞。其中riboTRACER? Green能夠在轉(zhuǎn)染后富集于細(xì)胞核，不依賴于siRNA或miRNA序列，可方便、快速、準(zhǔn)確地定量分析細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，以便對(duì)siRNA或miRNA轉(zhuǎn)染條件做進(jìn)一步優(yōu)化。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
1、使用方便：僅需3步，熒光顯微鏡觀察即可
2、準(zhǔn)確定量：富集于細(xì)胞核，精確定量轉(zhuǎn)染效率
3、毒性分析：可同時(shí)分析細(xì)胞毒性，優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑用量
哪種轉(zhuǎn)染試劑適合您？
銳博生物提供從siRNA/miRNA、mRNA/長鏈RNA到蛋白質(zhì)的全系列轉(zhuǎn)染試劑，請(qǐng)根據(jù)下表確定適合您的轉(zhuǎn)染試劑。
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siRNA/miRNA/質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑 基因抑制效率高
| mRNA/長鏈RNA轉(zhuǎn)染試劑 適用于原代細(xì)胞 | 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑 可實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染 |
| riboFECT? CP轉(zhuǎn)染試劑 | riboFECT? mRNA轉(zhuǎn)染試劑 | riboFECT? Protein轉(zhuǎn)染試劑
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| 試劑規(guī)格 | 0.5ml, 1ml | 0.5ml, 2.5ml | 0.5ml, 2.5ml |
| 樣品類型 | siRNA, miRNA | mRNA, 長鏈RNA | 蛋白質(zhì) |
| 轉(zhuǎn)染效率 | 很好 | 很好 | 高達(dá)98% |
| 細(xì)胞活力 | 很好 | 很好 | 好 |
| 細(xì)胞毒性 | 超低 | 超低 | 幾乎無細(xì)胞毒性 |
轉(zhuǎn)染細(xì)胞系 （部分） | HeLa，A549，HEK293T，HCT-116， NIH/3T3，HepG2，HNE1， L6，5637，H-bc，HSC，C2C12， Sertoli，CNE-2，5-8F， HAEC，DRG，CF，THP-1，MEL， PBMC，NSC，MSC，U2OS | human fibroblasts， CHO-K1， B16-F10，HEK293 |
HEK293，B16-F10，COS-7， COLO 205，dendritic cells (DC)， H9c2，human fibroblasts (primary cells)， HUVEC (primary cells)， Jurkat，MC3T3-E1，MEF (primary cells)， microglia， mouse podocytes (primary cells)， NIH/3T3，SK-OV-3，U-373 MG
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技術(shù)支持
評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系轉(zhuǎn)染的難易度
不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率差異很大，如何鑒定目的細(xì)胞系是否適合轉(zhuǎn)染是細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的基本問題。通常用熒光標(biāo)記的siRNA或miRNA進(jìn)行相應(yīng)的轉(zhuǎn)染對(duì)照試驗(yàn)，但該類轉(zhuǎn)染對(duì)照不均勻地分布于細(xì)胞各處，有時(shí)甚至?xí)尺B成團(tuán)，很難定量分析細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。riboTRACER?是細(xì)胞核富集的核酸指示劑，通過與細(xì)胞核染料結(jié)合，即可精確定量分析細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞毒性
圖1 使用riboMONITOR?檢測(cè)riboFECT? CP轉(zhuǎn)染siRNA于不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率
Cells transfected with riboTRACER? Green (100nM) with riboFECT? CP (5 μl/well),
fixed with PFA, stain with NUCLEOstain? and DEADstain?, 20X of microscope.
評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效果與細(xì)胞毒性
不同的轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效果差別很大，不恰當(dāng)?shù)剡x擇轉(zhuǎn)染試劑使轉(zhuǎn)染效率低下，甚至導(dǎo)致細(xì)胞的大量死亡。riboMONITOR?通過熒光定量檢測(cè)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、死亡細(xì)胞、全部細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞毒性的同時(shí)評(píng)估。
圖2 使用riboMONITOR? 轉(zhuǎn)染指示劑檢測(cè)3種轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效果
Reagent L的轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞毒性較大，易引起細(xì)胞大量死亡，Reagent X轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率不高。
而riboFECT? CP的轉(zhuǎn)染效率較高，幾乎無細(xì)胞毒性，能夠順利轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。
優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染效果
轉(zhuǎn)染試劑用量和細(xì)胞密度是轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，確保轉(zhuǎn)染效果的批次間的穩(wěn)定性，是實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性的重要保證。riboMONITOR? 通過結(jié)合細(xì)胞核染料，可快速檢測(cè)出細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，優(yōu)化最佳的轉(zhuǎn)染試劑用量及細(xì)胞密度，確定最適宜的轉(zhuǎn)染條件，以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染，減少實(shí)驗(yàn)中不必要的實(shí)驗(yàn)摸索。
A-B：采用0.4μl和1μl的Reagent L轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效果及細(xì)胞毒性檢測(cè)；
C-D：采用0.4μl和1μl的Reagent L分別進(jìn)行4萬和5萬細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明采用1μl Reagent L，
4萬細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高（C），細(xì)胞毒性最?。―）
關(guān)鍵字： 細(xì)胞轉(zhuǎn)染;轉(zhuǎn)染指示劑;
廣州市銳博生物科技有限公司（簡稱銳博生物）成立于2004年，是一家由諾貝爾獎(jiǎng)獲得者和國家重大人才工程入選者領(lǐng)銜的、以核酸技術(shù)為核心的國家火炬計(jì)劃重點(diǎn)高新技術(shù)企業(yè)。基于世界領(lǐng)先的寡核苷酸和mRNA技術(shù)，銳博生物致力于提供高品質(zhì)的各類寡核苷酸和mRNA產(chǎn)品（包括但不限于ASO、siRNA、CpG、Aptamer、crRNA、和tracrRNA）。此外，公司建立了符合或超過國際標(biāo)準(zhǔn)的寡核苷酸CDMO/CMO服務(wù)平臺(tái)、mRNA/LNP制劑開發(fā)和制造平臺(tái)，能夠?yàn)楹怂崴幬镩_發(fā)的各個(gè)階段提供一站式寡核苷酸/mRNA CDMO服務(wù)、以及LNP制劑開發(fā)和制造服務(wù)，為國內(nèi)外超過5000家機(jī)構(gòu)提供產(chǎn)品或服務(wù)，現(xiàn)已躋身于全球核酸藥CDMO的知名企業(yè)行列。銳博生物擁有60多項(xiàng)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)核酸技術(shù)發(fā)明，獲得了廣東省核酸藥物工程實(shí)驗(yàn)室、廣東省核酸醫(yī)藥工程技術(shù)研究中心、NMPA頒發(fā)的寡核酸藥品生產(chǎn)許可等資質(zhì)，是中國核酸行業(yè)的領(lǐng)軍企業(yè)之一。