開發(fā)和驗證用于測定大鼠血漿中植物黃素的 HPLC-MS/MS 方法并應用于藥代動力學研究。

 Radix Phtolaccae 的活性成分是 Phytolcaccagenin，一種三萜類皂苷。植物卡卡寧在抑制 LPS 誘導的炎癥方面具有超過七葉苷 A 及其衍生物的抗炎活性，并且具有較低的毒性特征和較少的溶血。迄今為止，沒有關(guān)于 Phytolaccagenin 的分析方法和藥代動力學研究的信息。
方法和結(jié)果：
為了探索該化合物的 PK 曲線，開發(fā)并驗證了大鼠血漿中 Phytolaccagenin 的 HPLC-MS/MS 測定。該方法根據(jù) FDA 行業(yè)指南進行了充分驗證。通過電噴霧電離在正離子模式下使用三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測，并在正離子模式下進行多反應監(jiān)測 （MRM）。監(jiān)測的轉(zhuǎn)變?yōu)?Phytolcaccagenin 的 m/z 533.2>515.3 和 I.S.的 491.2>473.2。在Symmetry C18色譜柱（4.6 mm×50 mm、3.5 μm）上進行梯度洗脫，流動相由乙腈和0.1%甲酸水組成，流速為1 ml/min，分流器比例為1：1。該方法使用 20 ng/mL 的 LLOQ 和 1000 ng/mL 的 ULOQ 進行了驗證。響應與濃度數(shù)據(jù)采用 1/x 加權(quán)擬合，相關(guān)系數(shù) （r） 大于 0.999。平均基質(zhì)效應和平均提取回收率均可接受。大鼠血漿中的驗證表明，Phytolaccagenin 在 -20°C 以下儲存 30 天，在室溫下（RT，22°C）穩(wěn)定 6 小時，在室溫下為自動進樣器小瓶中制備的對照樣品穩(wěn)定 12 小時，以及在 -20°C 下連續(xù)三個凍融循環(huán)的結(jié)果。
結(jié)論：
經(jīng)過驗證的方法已成功應用于 Phytolaccagenin 的靜脈推注藥代動力學研究在雄性 Sprague-Dawley 大鼠 （10 mg/kg，iv） 中。收集注射后 0 至 24 h 的血樣，并用 WinNonlin 分析數(shù)據(jù)。半衰期和清除率分別為 1.4±0.9 h 和 2.1±1.1 L/h/kg。