中文名：羅丹明標記鬼筆環(huán)肽

英文名：Rhodamine-Phalloidin

貨號：P378705

包裝：300t、50t

存儲溫度：避光,-20°C儲存

產(chǎn)品介紹：

這種橙色熒光鬼筆環(huán)肽綴合物（相當于TRITC 標記的鬼筆環(huán)肽）會選擇性結(jié)合F-肌動蛋白。鬼筆環(huán)肽衍生物經(jīng)常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細胞培養(yǎng)或無細胞實驗中用于標記、鑒定和定量F-肌動蛋白的便捷探針。鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白絲的結(jié)合比與肌動蛋白單體的結(jié)合要緊密得多，從而導致肌動蛋白亞基從絲端解離的速率常數(shù)降低，從而通過防止絲解聚而基本穩(wěn)定了肌動蛋白絲。而且，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動蛋白的ATP水解活性。鬼筆環(huán)肽在細胞中不同濃度下的功能不同。當以低濃度引入細胞質(zhì)時，鬼筆環(huán)肽將聚合度較低的胞質(zhì)肌動蛋白和纖維蛋白吸收到聚集的肌動蛋白聚合物的穩(wěn)定“島”中，但它不會干擾應(yīng)力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是研究F-肌動蛋白在細胞中分布的有效工具，方法是用熒光類似物標記鬼筆環(huán)肽并將其用于染色肌動蛋白絲以進行光學顯微鏡觀察。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細胞或固定細胞中的肌動蛋白絲以及體外觀察單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)的重要工具。

鬼筆環(huán)肽是從致命的傘形毒蕈蘑菇中分離出來的一種毒素。它是特異性結(jié)合于F-肌動蛋白的雙環(huán)肽。因此用熒光染料標記的鬼筆環(huán)肽可以非常方便的研究F-肌動蛋白的分布。鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，在半胱氨酸和色氨酸之間含有不常見的硫醚橋形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。在pH升高時，該硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽失去對肌動蛋白的親和力。

單位定義：一個單位（T）的定義是染色一個加載細胞的載玻片所用染料的量

Abs/Em (nm)：546/575

應(yīng)用范圍：

細胞骨架染色
使用方法：

1. 儲液制備

羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽：取適量甲醇或無菌水溶解棕色管中凍干的粉末，制備成 200T/mL 的儲液（300T 規(guī)格染料加入 1.5 mL 的液體，50T 規(guī)格染料加入 0.25 mL 的液體即可）。

羅丹明標記鬼筆環(huán)肽的一個單位（T）的定義是染色一個加載細胞的載玻片所用染料的量。對于羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽，使用時的推薦稀釋比例為 1: 40-1: 200，一個單位相當于 200 μL 總?cè)旧w積中加入 1-5 μL 200T/mL 儲備溶液。

注：稀釋比例可以根據(jù)實際染色效果進行適當調(diào)整。

2. 固定細胞染色

以下方案是針對生長在玻璃蓋玻片或 8 孔室玻片上的貼壁細胞的染色步驟。鬼筆環(huán)肽也可用于染色固定的冷凍或石蠟組織切片。

（1）用 PBS 清洗細胞 3 次。

（2）用含有 3.75%甲醛的 PBS 溶液固定細胞，冰上固定 15 min。

注：甲醇可以在固定過程中破壞肌動蛋白。因此最好避免含有任何甲醇的固定劑。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

（3）用 PBS 清洗細胞 3 次。

（4）用含 0.5% Triton X-100 的 PBS 溶液在室溫下透化細胞 10 min。

（5）用 PBS 清洗細胞 3 次。

（6）用 200 μL PBS 稀釋 1-5 μL 熒光標記的鬼筆環(huán)肽儲液，加入一個蓋玻片或孔中，室溫孵育 20 min，進行染色。

注：染色體積可根據(jù)樣本情況進行調(diào)節(jié)。孵育過程中為避免染液揮發(fā)，可將蓋玻片放于密封容器內(nèi)。

（7）用 PBS 清洗細胞 2-3 次。

（8）熒光顯微鏡觀察。標記的鬼筆環(huán)肽具有很好的光穩(wěn)定，樣品可以在 PBS 中成像，但為了效果最佳，也可以使用抗熒光淬滅劑觀察。

3. 活細胞染色

熒光標記的鬼筆環(huán)肽不具有細胞透性，因此沒有被廣泛用于活細胞標記。然而，有報道稱活細胞可能通過胞飲或未知機制進行標記。一般來說，染色活細胞時需要更多的染料?；蛘?，熒光標記的鬼筆環(huán)肽也可被注入到細胞中用于監(jiān)測肌動蛋白分布和細胞運動

注意事項：

1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進行后續(xù)實驗；

2. 本產(chǎn)品為凍干粉形式，微量不易觀察，使用前請瞬時離心，加適當溶劑溶解后使用，溶解后的溶液近乎透明色；

3.若配制成水溶液，應(yīng)小量分裝保存。

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