碧云天生產(chǎn)的BJ5183超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞，英文名BJ5183 Super Competent Cells，是一種專用于制備重組腺病毒質(zhì)粒的E. coli BJ5183即用型化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞。使用pUC19質(zhì)粒進(jìn)行熱激活轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率可以高達(dá)5×108cfu/μg DNA以上。
腺病毒載體被廣泛用于基因 ，然而腺病毒基因組長(zhǎng)達(dá)45kb，難以進(jìn)行試管內(nèi)分子操作。常用的策略是把目的基因構(gòu)建至穿梭質(zhì)粒(Shuttle vector)后，共轉(zhuǎn)該穿梭質(zhì)粒和帶有腺病毒骨架載體(Adenoviral backbone vector)至細(xì)胞內(nèi)，再以同源重組的方式將目的基因引入腺病毒載體。BJ5183菌株提供了兩個(gè)載體同源重組的必需元件，可高效制備并擴(kuò)增超螺旋狀的重組腺病毒質(zhì)粒。
BJ5183菌株的基因型為endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)。其中sbcBC和recBC的雙重突變，賦予其較強(qiáng)的重組能力，有利于轉(zhuǎn)入的目的基因與腺病毒質(zhì)粒的重組；endA1突變有利于質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定[1]；StrR使得該細(xì)胞具有硫酸鏈霉素抗性。
保存條件：
-80℃保存，一年內(nèi)有效。避免反復(fù)凍融，通常制備6個(gè)月后轉(zhuǎn)化效率隨保存時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低。
注意事項(xiàng)：
感受態(tài)細(xì)胞禁止反復(fù)凍融，并應(yīng)盡可能避免凍融，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率大幅下降。
感受態(tài)細(xì)胞融化后，須盡快加入待轉(zhuǎn)化樣品，不宜在無(wú)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的情況下放置時(shí)間超過10分鐘或以上時(shí)間，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
待轉(zhuǎn)化樣品的體積通常不宜超過感受態(tài)細(xì)胞體積的10%，樣品體積過大會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率下降。
感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于溫度變化非常敏感，需要避免出現(xiàn)不應(yīng)有的使用說(shuō)明之外的溫度變化。
感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于機(jī)械力非常敏感。加入待轉(zhuǎn)化樣品時(shí)應(yīng)輕柔操作，不能使用移液槍吹打混勻。
通常僅建議取部分樣品用于轉(zhuǎn)化，這樣萬(wàn)一遇到轉(zhuǎn)化失敗的情況，還留有樣品可以再次進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
本產(chǎn)品 于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或 ，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： 超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞;碧云天代理;
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