甘油三酯（triglyceride, TG）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度50T/48S
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
甘油三酯（triglyceride, TG）含量測(cè)定試劑盒測(cè)定意義：
TG是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細(xì)胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。
測(cè)定原理：
用異丙醇提取TG，脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H2O2，過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505 nm處有特征吸收峰。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配置：
試劑一：液體60 mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體26 mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體26 mL×1瓶，4℃避光保存。
TG的提取：
1、 組織中TG的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測(cè)液。
2、細(xì)胞、細(xì)菌中TG的提?。?/span>先收集400-500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s），8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測(cè)液。
3、血清（漿）樣品：直接測(cè)定。
甘油三酯（triglyceride, TG）含量測(cè)定試劑盒測(cè)定操作：
可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到505 nm。
試劑（μL） | 空白管 | 測(cè)定管 |
樣本 |
| 50 |
試劑一 | 50 |
|
試劑二 | 475 | 475 |
試劑三 | 475 | 475 |
混勻，室溫下靜置20min，于505 nm波長(zhǎng)處讀取吸光值，記為A空白和A測(cè)定，△A=A測(cè)定-A空白?？瞻坠苤恍铚y(cè)一管。
計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.6522x - 0.0199； R2 = 0.9979；x：標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL） y：吸光值差值ΔA。
1. 血清（漿）中甘油三酯含量計(jì)算：
TG含量（mg/mL）=（ΔA+0.0199）÷0.6522=1.533×（ΔA+0.0199）
2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中甘油三酯含量計(jì)算：
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
TG含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.6522×V樣÷(Cpr×V樣）=1.533×（ΔA+0.0199）÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
TG含量（mg/ g 鮮重）=（ΔA+0.0199）÷0.6522×V樣÷(W×V樣÷V樣總）=1.533×（ΔA+0.0199）÷ W
V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入試劑一體積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g；
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：
1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開(kāi)后應(yīng)該及時(shí)蓋緊。
2. 最低檢出限為100μg/mL。
關(guān)鍵字： 甘油三酯（triglyceride, T;甘油三酯（triglyceride, T;
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