果糖（fructose ，FT）含量試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
果糖（fructose ，F(xiàn)T）含量試劑盒測定意義：
果糖是一種最為常見的己酮糖，是葡萄糖的同分異構體，以游離狀態(tài)大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中，能與葡萄糖結合生成蔗糖。果糖是最甜的單糖，廣泛應用于食品、醫(yī)藥、保健品生產(chǎn)中。
還原糖含量試劑盒測定原理：
果糖與間苯二酚反應，生成有色物質，在480nm下有特征吸收峰。
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、蒸餾水
試劑的組成和配制
還原糖含量試劑盒說明書
分光光度法50管/24樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
還原糖含量試劑盒測定意義：
還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。植物體內的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等，是最常見的單糖和雙糖，其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物，也是進一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。
測定原理：
加熱促進堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征吸收峰；在一定的濃度范圍內，還原糖含量與540nm吸光度成線性關系，根據(jù)標準曲線，即可求出樣品中還原糖的量。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：15mL×1瓶 ，4℃保存；
樣品中還原糖的提取：
1、細菌或細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬細菌或細胞加入2mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復30次），轉移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。
2、組織的處理：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g組織，加入2mL試劑一），冰浴勻漿，轉移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。
3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.2mL血清（漿）加入2mL試劑一），冰浴勻漿，轉移到有蓋離心管中（防止加熱時水分散失），80℃水浴中40min并且振蕩8~10次，8000g，25℃離心10min，取上清供測定用。
測定步驟：
1、 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。
2、 調節(jié)水浴鍋至95℃。
3、 在EP管中加入下列試劑：
試劑（μL） | 對照管 | 測定管 |
樣本 | 700 | 700 |
試劑二 |
| 500 |
蒸餾水 | 500 |
|
將各管搖勻，在95℃水浴中加熱5min（蓋緊，防止水分散失），取出后立即冷卻至室溫，混勻。在540nm波長下讀取對照管和測定管吸光值。計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。
注意：如果ΔA大于2，需要將樣本用試劑一稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)（若顯色后出現(xiàn)分層現(xiàn)象，可改用蒸餾水稀釋）。
還原糖含量計算：
1、標準條件下測定回歸方程為y = 8.3796x- 0.3034；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、按樣本鮮重計算：
還原糖(μg/g鮮重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W
3、按樣本蛋白濃度計算：
還原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr
4、按細菌或細胞密度計算：
還原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（1000×V1÷V2）=0.239×(ΔA＋0.3034)
5、按血清（漿）體積計算：
還原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（V3×V1÷V2）=1193.4×(ΔA＋0.3034)
1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入樣本體積，0.7mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿體積），0.2mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；1000：細菌或細胞總數(shù)，1000萬。
注意：最低檢測限為1mg/g鮮重或10μg/mg p
：
提取液：液體 100ml×1瓶，4℃保存；
試劑一：1mg/mL標準液10mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體 40ml×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體 15ml×1瓶，4℃避光保存；
試劑四：粉劑0.5g×1瓶，常溫保存。
果糖提取：
稱取0.1~0.2g樣本，常溫研碎；加入1mL提取液，適當研磨后快速轉移到有蓋離心管中；置于80℃水浴鍋中10min（蓋緊，以防止水分散失），振蕩3~5次，冷卻后，4000g，25℃離心10min，取上清；加入少量（約2mg）試劑四，80℃脫色30min（蓋緊，以防止水分散失）；再加入1mL提取液，4000g，25℃離心10min，取上清液測定。
果糖（fructose ，F(xiàn)T）含量試劑盒測定步驟：
1、 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至480nm，蒸餾水調零。
2、 樣本測定（在1.5mL EP管中依次加入下列試劑）：
試劑（μL） | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
樣本 |
|
| 100 |
試劑一 |
| 100 |
|
蒸餾水 | 100 |
|
|
試劑二 | 700 | 700 | 700 |
試劑三 | 200 | 200 | 200 |
混勻，95℃水浴反應30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后測定480nm處光吸收值，空白管、標準管和測定管分別記為A1、A2和A3。
果糖含量計算：
1、果糖含量（mg/mg prot）=（C標準管×V1）×(A3－A1)÷(A2－A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷（A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測定蛋白濃度。
2、果糖含量(mg/g鮮重）=（C標準管×V1）×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= 2× (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。
C標準管：標準管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，2mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
注意：最低檢測限為100ng/g鮮重或1ng/mg
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