注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈,其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調查植物體內糖代謝都有重要意義。
測定原理:
利用80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,直鏈淀粉與碘形成的絡合物在620nm下有吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶;4℃保存;
試劑二:乙醚50mL×1瓶;(自備)
試劑三:液體50mL×1瓶;4℃保存;
試劑四:液體4mL×1瓶; 4℃保存;
試劑五:液體1mL×1瓶;4℃保存;
淀粉提取:
稱取0.01~0.02g烘干樣本(建議稱取約0.01g)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑二(乙醚)振蕩5min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑三充分溶解,90℃水浴10min,冷卻后待測。
測定步驟:
1、 分光光度計30min以上,調節(jié)波長至620nm,蒸餾水調零。
測定管:在EP管中依次加入100uL樣本, 70uL試劑四,600uL蒸餾水,10uL試劑五,220uL蒸餾水,混勻,測定620nm處吸光值,記為A測定。
空白管:在EP管中依次加入100uL試劑三, 70uL試劑四,600uL蒸餾水,10uL試劑五,220uL蒸餾水,混勻,測定620nm處吸光值,記為A空白。
直鏈淀粉含量計算:
標準條件下測定的回歸方程為y=1.755x+0.0062;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。
1、按照蛋白濃度計算
直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測定-A空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A測定-A空白-0.0062) ÷Cpr
2、按樣本干重計算
直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測定-A空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A測定-A空白
-0.0062) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
關鍵字: 直鏈淀粉含量試劑盒;支鏈淀粉含量試劑盒;
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