螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒
一、產(chǎn)品簡介。
本產(chǎn)品的檢測試劑中含有 Luciferin，在螢火蟲螢光素酶（Luciferase）的作用下被氧化成Oxyluciferin，并發(fā)出生物螢光?？梢酝ㄟ^檢測生物螢光的強度，分析螢火蟲螢光素酶的活性。為了檢測目的基因的轉(zhuǎn)錄水平變化，可以將目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5’端的啟動子區(qū)域的 DNA 序列克隆到螢火蟲螢光素酶基因的上游（5’端），也可以把目的基因的 3’-UTR 區(qū)域的 DNA 序列添加到螢光素酶基因的下游，構(gòu)建報告基因質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，檢測螢光素酶的活性，確定目的基因的表達變化，完成報告基因檢測分析。
二、運輸與存儲條件。
本產(chǎn)品低溫運輸，并依據(jù)各組份保存條件分開保存，有效期 12 個月。
三、特點與優(yōu)勢。
1. 本產(chǎn)品靈敏度高于市售同類試劑，可以更有效的檢測基因轉(zhuǎn)錄水平變化。
2. 本試劑盒操作簡單，能夠快速完成螢火蟲螢光素酶活性檢測。
四、使用說明。
1. 以 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞為處理對象，實驗步驟如下：
2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗請參考本公司轉(zhuǎn)染試劑（Omifection，Cat：Omc-01）說明書中的實驗步驟，將編碼螢火蟲螢光素酶基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入 6 孔板的細(xì)胞中，2 μg/孔。
3. 細(xì)胞裂解液配制。將 5×細(xì)胞裂解液與 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×細(xì)胞裂解液。現(xiàn)用現(xiàn)配，剩余的細(xì)胞裂解液可在 4℃保存一周。
4. 細(xì)胞裂解。轉(zhuǎn)染 48 h，棄培養(yǎng)液，預(yù)冷的 PBS 洗滌細(xì)胞 1 次，加入 1 ml 細(xì)胞裂解液（1×），置于 4 ℃冰箱中的搖床上，搖晃 15-30 min，裂解細(xì)胞。裂解液轉(zhuǎn)入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃離心 5 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管中，作為待測樣品。加入細(xì)胞裂解液后也可直接用細(xì)胞刮刀刮下細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至 EP 管中，用移液器混勻，12,000×g，4 ℃離心 5 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP管中，作為待測樣品。
5. 活性檢測。打開檢測儀器，設(shè)置測定參數(shù)，一般延遲時間（整合時間）為 2 sec，測定時間為 10-20 sec。吸取 100 μl 螢火蟲螢光素酶檢測試劑，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待測樣品（細(xì)胞裂解液），混勻，儀器檢測。
五、注意事項
1. 由于溫度對酶促反應(yīng)有影響，樣品和試劑應(yīng)達到室溫后再進行測定活性測定。
2. 檢測試劑不可反復(fù)凍融，可分裝成100 μl/管，置于-80 ℃長期保存。
3. 手動測定時，樣品加入底物時的間隔時間和混合次數(shù)盡量一致，減少操作誤差。
關(guān)鍵字： 螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒 ;螢火蟲螢光素酶;Luciferase;
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